德氏乳杆菌保加利亚亚种atpA抗原的表达及抗体制备

• 作者: 于微 刘飞 焦月华 谷春涛 郭文奎 霍贵成
• 来源期刊: 中国乳品工业
• 学科: 生物学
• 关键词: 德氏乳杆菌保加利亚亚种 atpA抗原 蛋白表达 抗体制备
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 21-24
• 页数: 4页
• 分类号: Q933
• 字数: 3324字
• 语种: 中文

摘要

利用原核表达德氏乳杆菌保加利亚亚种atpA抗原并进行抗体制备,以便用于Western blot分析.首先利用PCR的方法扩增出atpA蛋白的基因片段,利用大肠杆菌pQE 40原核表达系统表达重组atpA抗原,镍柱亲和层析纯化表达蛋白后,常规免疫两只新西兰长耳白兔.利用ELISA检测兔血清的效价来制备多克隆抗体,然后用Protein A纯化抗体.最后得到的atpA抗体进行Western blot检测验证抗体的特异性.结果表明,两只新西兰长耳白兔的血清效价分别为1∶20000和1∶80000；Western blot检测表明,制备的抗体能够与H+-AT-Pase蛋白进行特异性的结合.本研究成功的在大肠杆菌中表达了德氏乳杆菌保加利亚亚种的atpA蛋白,并利用其制备了效价较高的多克隆抗体,该抗体可作为一抗用于Western blot分析.