人SUMO病毒载体构建及稳转神经母细胞瘤SHSY5Y细胞系的建立

• 作者: 于布为 常晶 薛庆生 陆菡
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 小泛素化相关修饰蛋白 逆转录病毒 神经母细胞瘤细胞
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-3
• 页数: 3页
• 分类号: R329.2
• 字数: 2841字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2013.10.001

摘要

目的 构建表达人小泛素化相关修饰蛋白(SUMO)基因的逆转录病毒载体,并观察其稳定感染神经母细胞瘤SHSY5Y细胞后SUMO蛋白的表达情况.方法 用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切peDNA 3.0-HA-SUMO1、pcDNA 3.0-HA-SUMO2、pcDNA3.0-HA-SUMO3质粒,得到3×Flag-SUMOs基因的编码序列,定向插入到pBabe-puro载体中,经扩增、筛选阳性克隆、酶切和测序验证后,转染293T细胞进行病毒包装、扩增、纯化获取逆转录病毒颗粒.将逆转录病毒颗粒感染SHSY5Y细胞,经嘌呤霉素筛选后抗性克隆集落长出.Western blot检测稳定转染的pBabe-3 ×Flag-SUMOs-SHSY5Y单克隆细胞SUMO1～3的表达.结果 pBabe-3×Flag-SUMOs-puro质粒构建正确.稳定转染的SHSY5Y细胞系3×Flag-SUMOs表达明显增强.结论 成功构建了稳定表达SUMO的pBabe-3 × Flag-SUMOs-SHSY5Y细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于布为		228	1188	16.0	25.0
2	薛庆生		91	494	11.0	19.0
3	陆菡		9	15	3.0	3.0
4	常晶		3	8	1.0	2.0