响应面法优化考马斯亮蓝G-250溶液的配制

• 作者: 王永刚 王玉丽 苏移 马建忠 马雪青
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 化学
• 关键词: 考马斯亮蓝G-250 磷酸 乙醇 响应面 优化
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 57-62
• 页数: 6页
• 分类号: O6-33
• 语种: 中文

摘要

试验研究了各组分磷酸、乙醇、考马斯亮蓝G-250在考马斯亮蓝G-250溶液中的作用及其对测定蛋白质浓度灵敏度和准确度的影响,结合全波长扫描光谱法分析了溶液配制过程中的变色机理.在此基础上,以一系列牛血清白蛋白溶液标准浓度和测定值之间的差值平方和的均方(S值)为响应值,采用单因素试验和响应面分析法优化考马斯亮蓝G-250溶液的配制条件.结果表明,乙醇是用来降低水溶液的极性环境,促进考马斯亮蓝G-250的溶解；磷酸是为考马斯亮蓝G-250表面电荷发生变化的促进剂；两者构成了影响变色灵敏度的主要因素,考马斯亮蓝G-250分子在溶液中不同的存在形式使反应体系呈现出从蓝色→绿色→棕红色等颜色变化；响应面优化配制条件为:60 mg/L考马斯亮蓝G-250、50 mL/L 95％乙醇、130 mL/L 85％磷酸时,S值最小值为2.07,即在此配制条件下的牛血清白蛋白测定值与标准值最接近.同时以不同标准蛋白质为试样对所配制的溶液进行准确度和灵敏度试验,结果表明对牛血红蛋白、γ-球蛋白测定准确度和灵敏度较好,对胰蛋白酶、胃蛋白酶灵敏度较差,主要原因是由于蛋白质组成差异所引起的.