内质网蛋白质折叠分子伴侣在氟尿苷耐药绒毛膜癌JeG-3/FUDRA细胞中的作用

• 作者: 万希润 冯凤芝 向阳 孟希亭 张雪燕 林晨 钱海利 韩冰
• 来源期刊: 中华妇产科杂志
• 关键词: 绒毛膜癌 细胞系,肿瘤 抗药性,肿瘤 蛋白质折叠 氟尿苷 蛋白质二硫化物异构酶 热休克蛋白质类
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 41-45
• 页数: 5页
• 字数: 4715字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-567x.2013.01.010

摘要

目的 比较氟尿苷(FUDR)耐药的绒毛膜癌(绒癌)细胞系JeG-3/FUDRA细胞和其亲本细胞系JeG-3细胞(FUDR敏感)之间表达差异的蛋白质,探讨其在绒癌耐药发生中的作用.方法 采用双向差异凝胶电泳(2-DE)技术筛选JeG-3/FUDRA细胞和JeG-3细胞之间表达差异的蛋白质,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术鉴定差异表达的蛋白质.利用靶基因功能的显著性(GO)分析和途径(Pathway)分析方法对差异表达的蛋白质进行分析和筛选,筛选出目的蛋白质.蛋白印迹法验证JeG-3/FUDRA细胞中目的蛋白质的表达；小分子干扰RNA(siRNA)干扰JeG-3/FUDRA细胞中目的蛋白质的表达后,观察其耐药性的变化.结果 2-DE技术检测显示,在JeG-3/FUDRA细胞和JeG-3细胞中共筛选出46个差异表达的蛋白质,并经MALDI-TOF-MS技术鉴定证实其均为差异表达的蛋白质点；通过GO分析和Pathway分析方法对差异表达的蛋白质进行分析和筛选后发现,内质网蛋白质折叠分子伴侣钙网蛋白(CALR)、蛋白二硫异构酶A3(PDIA3)和相对分子质量为78 000的葡萄糖调节蛋白(GRP78)在耐药细胞中表达均明显增高.蛋白印迹法检测显示,JeG-3/FUDRA细胞中CALR、PDIA3、GRP78蛋白的表达强度明显高于JeG-3细胞.干扰JeG-3/FUDRA细胞中CALR和PDIA3基因的表达后,JeG-3/FUDRA细胞的耐药性分别下降了76.3％(干扰前后分别为36.7±2.0和8.7±3.1,P＜0.05)和51.4％(干扰前后分别为36.7±2.0和17.8±1.2,P＜0.05).结论 内质网蛋白质折叠分子伴侣CALR、PDIA3、GRP78很可能参与了绒癌细胞FUDR耐药的发生.