简便HBV基因型S基因PCR-RFLP分型方法的建立

• 作者: 丛旭 宋广军 杜绍财 饶慧瑛 魏来
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 关键词: 肝炎病毒,乙型 基因型 聚合酶链反应 多态性,限制性片段长度
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 420-424
• 页数: 5页
• 字数: 4503字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2013.05.009

摘要

目的 建立简便HBV基因型S基因PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)分型方法(以下简称“简便PCR-RFLP法”),并评价其临床应用价值.方法 临床诊断研究.查阅并比较GenBank中128株HBV(基因型A～D型)S基因片段(S区nt253-687),设计限制性内切酶Hinf Ⅰ、Ear Ⅰ、Apo Ⅰ鉴别A～D基因型分型方法,并评价简便PCR-RFLP法检测HBV DNA的最低检测下限、重复性；然后,用该方法检测50例慢性乙型重型肝炎患者的HBV基因型,同时用直接测序法验证简便PCR-RFLP法检测HBV基因型的一致性.结果 建立了简便PCR-RFLP法HBV基因分型的方案,通过限制性内切酶Hinf Ⅰ一次酶切就可分出我国流行的B型、C型、D型等毒株及B/C混合型.随机抽取3份标本,不同稀释浓度下,用简便PCR-RFLP法重复检测HBV基因型,分型结果均与原血清完全一致,且最低检测下限约为7 ～9 IU/ml.经Hinf Ⅰ酶一步酶切后,用简便PCR-RFLP法从50例患者标本中,检出B型23份、C型10份；经直接测序法验证,从PCR产物中检出B型23份、C型10份,2种方法检测B、C型基因结果完全一致(Kappa=1.00,P=0.001),简便PCR-RFLP法检出B/C混合型9份,优于PCR产物直接测序法(0份,x2=18.00,P=0.001).Hinf Ⅰ酶一步酶切后分出的ABD型8份,进一步酶切及应用PCR产物直接测序法检测均为B型变异株.结论 建立的简便PCR-RFLP法对HBV基因分型有较高的灵敏度和重复性,且在检出混合基因型方面具有优势,更为简便.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏来	北京大学人民医院北京大学肝病研究所	209	1397	18.0	26.0
2	丛旭	北京大学人民医院北京大学肝病研究所	39	349	9.0	17.0
3	杜绍财	北京大学人民医院北京大学肝病研究所	37	155	8.0	10.0
4	饶慧瑛	北京大学人民医院北京大学肝病研究所	42	90	6.0	7.0
5	宋广军	北京大学人民医院北京大学肝病研究所	4	5	1.0	1.0