人单核细胞趋化因子-1基因重组卡介苗的构建与鉴定

• 作者: 徐耀庭 李惠明 李杜渐 许晓文 韦芳 顾伟平 顾炜 黄汝强
• 来源期刊: 现代泌尿外科杂志
• 关键词: 卡介苗 单核细胞趋化因子-1 膀胱肿瘤 基因重组
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 195-197
• 页数: 3页
• 分类号: R737
• 语种: 中文

摘要

目的 构建能自动分泌性表达单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的重组卡介苗.方法 分别以卡介苗(BCG)和人MCP-1cDNA为模板,通过PCR扩增得到120 bp的BCG Ag85B信号肽基因序列和300 bp的MCP-1基因序列.将上述两片段基因序列插入大肠杆菌-卡介苗穿梭质粒pMV261,得到重组质粒pMV261-Ag85B-MCP-1.测序鉴定完毕后,用电穿孔法将该重组质粒导入BCG中,构建重组卡介苗rBCG MCP-1.分别应用PCR扩增和Western blot检测rBCG MCP-1中MCP-1的基因和蛋白的表达.结果 质粒pMV261-Ag85B MCP-1用双酶切和PCR扩增及测序鉴定证实克隆基因BCGAg85B信号肽和MCP-1正确插入载体pMV261.Western blot显示rBCG MCP-1的培养上清和菌体中均可检测到MCP-1蛋白的表达.ELISA法可检测到培养上清中有高表达的MCP-1蛋白(340 pg/mL).结论 成功构建了能分泌MCP-1的新型重组卡介苗rBCG MCP-1,为进一步研究其抗膀胱肿瘤的疗效打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韦芳	上海交通大学附属上海市第一人民医院实验中心	23	91	5.0	9.0
2	李惠明	上海交通大学附属上海市第一人民医院实验中心	21	50	4.0	6.0
3	徐耀庭	上海市第一人民医院分院泌尿外科	27	117	7.0	9.0
4	许晓文	上海市第一人民医院分院泌尿外科	20	70	5.0	7.0
5	黄汝强	上海市第一人民医院分院泌尿外科	19	93	5.0	8.0
6	李杜渐	上海市第一人民医院分院泌尿外科	14	65	4.0	7.0
7	顾炜	上海市第一人民医院分院泌尿外科	26	177	7.0	12.0