慢病毒载体介导IL-24基因转导人骨髓间充质干细胞的实验研究

• 作者: 周清华 李伟强 李印 祁秋干 秦建军 陈霏
• 来源期刊: 中国肺癌杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人骨髓间充质干细胞 IL-24 EGFP 基因转导 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 7-11
• 页数: 5页
• 分类号: R734.2
• 字数: 3899字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2013.01.02

摘要

背景与目的 以人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)作为抑癌基因IL-24的细胞载体的研究目前未见报道.应用Gateway法构建共表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因和IL-24基因的慢病毒载体,探讨其对hBMSCs的转导情况,为今后肿瘤的基因治疗奠定基础.方法 应用DNA重组技术构建含有IL-24和EGFP基因的慢病毒表达载体,并与慢病毒包装系统(ViraPowerTM Lentiviral Packaging Mix)共转染293FT细胞,收集上清,纯化浓缩,测定重组病毒的滴度.取重组慢病毒感染hBMSCs,通过嘌呤霉素筛选并纯化hBMSCs,应用实时荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)及ELISA法分别检测hBMSCs中IL-24mRNA及IL-24蛋白水平的表达情况.结果 成功构建了共表达IL-24和EGFP基因的重组慢病毒载体,经包装、纯化及浓缩,病毒滴度为7.25× 107 PFU/mL.重组慢病毒转导hBMSCs后,通过筛选获得纯化,转导效率可达到100％.qPCR检测示:转导组IL-24 mRNA表达明显高于未转导组(P＜0.05)；ELISA法检测显示转导组hBMSCs上清液IL-24蛋白表达40 μg/L,未转导组为阴性.结论 构建的携带IL-24基因的重组慢病毒载体可有效转导hBMSCs,表达IL-24蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	秦建军	郑州大学附属肿瘤医院胸外科	53	253	8.0	15.0
2	李伟强	中山大学干细胞与组织工程中心	9	11	2.0	2.0
3	李印	郑州大学附属肿瘤医院胸外科	46	378	11.0	18.0
4	陈霏	中山大学干细胞与组织工程中心	2	5	2.0	2.0