兔视黄醇结合蛋白4基因的克隆及原核表达

• 作者: 刘家森 单丽玲 原冬伟 孙宏勇 曲连东 王泽祥 郭东春
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 兔视黄醇结合蛋白4 原核表达 肝细胞
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 53-56
• 页数: 4页
• 分类号: Q785
• 字数: 2172字
• 语种: 中文

摘要

为表达兔视黄醇结合蛋白4 (rRBP4),提取兔肝脏组织总RNA,采用RT-PCR技术扩增了rRBP4的基因,大小为606 bp.将其克隆于原核表达载体pET-32a(+)获得表达重组质粒,并转化大肠埃希菌BL21 (DE3) Plyss中进行表达,pET-32a-rRBP4以包涵体形式表达,包涵体经过洗涤、变性后,用镍离子亲和层析柱纯化,并利用尿素梯度透析法复性.SDS-PAGE分析表明,获得与预期分子质量一致的特异性目的蛋白；Western blot检测表明,重组蛋白与小鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性反应.