SYBR Green实时定量PCR检测转Fat-1基因水牛体细胞方法的建立

• 作者: 庞春英 杨炳壮 梁贤威 王建 邓廷贤
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 实时荧光定量PCR 水牛 Fat-1基因 基因拷贝数
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 畜牧生产
• 页码范围: 36-39
• 页数: 4页
• 分类号: Q81|S823
• 字数: 2904字
• 语种: 中文

摘要

荧光定量PCR是近些年发展起来的一项新技术,可用于检测外源基因的整合拷贝数、临床诊断、食品安全和动物疾病检测等领域,具有广阔的应用前景.本文构建了携带Fat-1基因的标准品质粒,以SYBR Green为荧光染料,进行实时荧光定量PCR反应,建立标准曲线,并结合绝对定量法检测Fat-1基因在水牛耳缘和肾脏成纤维细胞基因组中的整合拷贝数.结果表明,转Fat-1基因的水牛体细胞的Ct值与起始拷贝数对数的回归方程为:y=-3.43x+31.01,R2为0.998 7,反应效率为99.5％,具有良好的重复性.本文建立的这种高效检测水牛体细胞基因组中外源基因拷贝数的方法,为后期转Fat-1基因水牛的表达分析和检测等研究奠定基础.