胰腺癌PANC1细胞microRNA-217靶基因ANLN的鉴定

• 作者: 侯宝华 区金锐 崔鹏 江寅 王慧玲 简志祥
• 来源期刊: 中华胰腺病杂志
• 关键词: 胰腺肿瘤 微RNAs miR-217 基因 ANLN
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 175-178
• 页数: 4页
• 字数: 2165字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2013.03.008

摘要

目的 通过实验验证ANLN为microRNA-217(miR-217)的靶基因.方法 使用生物学软件预测miR-217调控的靶基因可能为ANLN.设计并合成mR-217结合的ANLN及突变型ANLN(mutANLN)序列,将其PCR扩增的片段插入表达质粒psiCHECK-2,构建重组质粒psiCHECK-2-ANLN及psiCHECK-2-mutANLN.采用脂质体法将2个重组质粒单独或分别与miR-217、miR-217 inhibitor及与人同源性远的miRNA序列(NC)、NC inhibitor共转染胰腺癌PANC1细胞,采用双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性,采用蛋白质印迹法检测ANLN蛋白的表达.结果 转染psiCHECK-2-ANLN、psiCHECK-2-ANLN+miR-217、psiCHECK-2-ANLN+miR-217 inhibitor、psiCHECK-2-ANLN+NC、psiCHECK-2-ANLN+ NC inhibitor各组间的荧光素酶活性分别为2.221±0.188、0.769±0.061、3.764±0.371、2.265±0.201、2.242 ±0.018,差异有统计学意义(F =77.405,P＜0.01),但psiCHECK-2-ANLN组、psiCHECK-2-ANLN+ NC组及psiCHECK-2-ANLN+ NC inhibitor组两两比较差异无统计学意义,而psiCHECK-2-ANLN+ miR-217组的荧光素酶活性较这3组明显下降,psiCHECK-2-ANLN+miR-217inhibitor组活性较其他4组明显升高(P值均＜0.01).转染psiCHECK-2-mutANLN各组间荧光素酶活性差异无统计学意义(P=0.053).psiCHECK-2-ANLN+ miR-217共转染组PANC1细胞的ANLN蛋白表达水平较单纯转染psiCHECK4-ANLN组细胞的ANLN蛋白表达明显下调.结论 在胰腺癌中,ANLN可能是miR-217的直接靶基因.