急性病毒性坏死病毒引物酶表达及酶学活性分析

• 作者: 潘鲁青 王崇明 钱璟 黄倢
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 引物酶 原核表达 Pico-Green核酸染料 酶学活性 多聚胞嘧啶寡核苷酸
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 页码范围: 1401-1408
• 分类号: Q939.4|S943
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2013.38510

摘要

根据急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV) ORF 024序列设计引物,以AVNV的DNA为模板进行扩增AVNV引物酶(primase)基因,同时构建表达质粒pET32aprim,并转化至E.coli BL21(DE3)进行诱导表达.SDS-PAGE检测显示诱导表达两条蛋白条带,其中分子量为60 ku的蛋白条带与预期表达蛋白条带大小一致,另一蛋白条带分子量约为55 ku,经Western-blotting及质谱分析鉴定分子量60 ku的蛋白条带为AVNV-引物酶,而表达出的55 ku蛋白条带存在部分引物酶多肽片段.RNA结合荧光染料Pico-Green在30 min内荧光强度比较稳定,从而确定30 min为进行AVNV引物酶活性分析的最佳终止反应时间,并在引物合成实验中观察到30 min内引物酶活性较高.当使用多聚胞嘧啶寡核苷酸poly(d C)为模板时,重组引物酶能特异性催化底物GTP.0.1 mmol/L Zn2+可显著增强引物酶活性,而1 mmol/L Mn2+和EDTA能抑制引物酶活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄倢	中国水产科学研究院黄海水产研究所	111	1805	25.0	37.0
2	潘鲁青	中国海洋大学水产学院海水养殖教育部重点实验室	102	1937	24.0	39.0
3	王崇明	中国水产科学研究院黄海水产研究所	30	428	12.0	20.0
4	钱璟	中国海洋大学水产学院海水养殖教育部重点实验室	1	4	1.0	1.0