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急性病毒性坏死病毒引物酶表达及酶学活性分析
急性病毒性坏死病毒引物酶表达及酶学活性分析
作者:
潘鲁青
王崇明
钱璟
黄倢
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
引物酶
原核表达
Pico-Green核酸染料
酶学活性
多聚胞嘧啶寡核苷酸
摘要:
根据急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV) ORF 024序列设计引物,以AVNV的DNA为模板进行扩增AVNV引物酶(primase)基因,同时构建表达质粒pET32aprim,并转化至E.coli BL21(DE3)进行诱导表达.SDS-PAGE检测显示诱导表达两条蛋白条带,其中分子量为60 ku的蛋白条带与预期表达蛋白条带大小一致,另一蛋白条带分子量约为55 ku,经Western-blotting及质谱分析鉴定分子量60 ku的蛋白条带为AVNV-引物酶,而表达出的55 ku蛋白条带存在部分引物酶多肽片段.RNA结合荧光染料Pico-Green在30 min内荧光强度比较稳定,从而确定30 min为进行AVNV引物酶活性分析的最佳终止反应时间,并在引物合成实验中观察到30 min内引物酶活性较高.当使用多聚胞嘧啶寡核苷酸poly(d C)为模板时,重组引物酶能特异性催化底物GTP.0.1 mmol/L Zn2+可显著增强引物酶活性,而1 mmol/L Mn2+和EDTA能抑制引物酶活性.
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急性病毒性坏死病毒引物酶表达及酶学活性分析
来源期刊
水产学报
学科
农学
关键词
引物酶
原核表达
Pico-Green核酸染料
酶学活性
多聚胞嘧啶寡核苷酸
年,卷(期)
2013,(9)
所属期刊栏目
研究方向
页码范围
1401-1408
页数
分类号
Q939.4|S943
字数
语种
中文
DOI
10.3724/SP.J.1231.2013.38510
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
黄倢
中国水产科学研究院黄海水产研究所
111
1805
25.0
37.0
2
潘鲁青
中国海洋大学水产学院海水养殖教育部重点实验室
102
1937
24.0
39.0
3
王崇明
中国水产科学研究院黄海水产研究所
30
428
12.0
20.0
4
钱璟
中国海洋大学水产学院海水养殖教育部重点实验室
1
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传播情况
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引文网络
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水产学报
主办单位:
中国水产学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1000-0615
CN:
31-1283/S
开本:
大16开
出版地:
上海市临港新城沪城环路999号
邮发代号:
4-297
创刊时间:
1964
语种:
chi
出版文献量(篇)
3756
总下载数(次)
11
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