microRNA-29b在血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用

• 作者: 戴晓春 杨德业 林素 潘嘉林 王本极 王良国 邵驾宇 黄晓燕
• 来源期刊: 温州医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: miR-29b 自发性高血压大鼠 血管紧张素Ⅱ 肾小管上皮细胞 上皮细胞-间充质转分化
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 71-77
• 页数: 7页
• 分类号: R541
• 字数: 6559字
• 语种: 中文

摘要

目的:研究microRNA-29b(miR-29b)在血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞间充质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的角色.方法:实时定量PCR检测自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)和Wistar-Kyoto (WKY)大鼠肾脏皮质组织miR-29b表达的差异.体外培养NRK-52E大鼠肾小管上皮细胞,给予血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)10-7 mol/L(为AngⅡ组),以正常培养的细胞作空白对照,实时定量PCR检测AngⅡ组和正常对照组细胞miR-29b表达差异,运用WesternBolt技术和实时定量PCR技术分别检测AngⅡ组和空白对照组TGF-β、α肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)的表达量.进一步分别再转染miR-29b inhibitor和miR-29b mimics,建立miR-29b低表达和高表达细胞模型.低表达模型实验分三组:①空白对照组:正常培养的肾小管上皮细胞未经任何处理；②低表达组:转染miR-29b inhibitor；③阴性对照组:转染随机合成NC microRNA片段.高表达模型实验分三组:①空白对照组:肾小管上皮细胞给予AngⅡ(10-7 mol/L)诱导；②高表达组:肾小管上皮细胞给予AngⅡ(10-7 mol/L)诱导,同时转染miR-29b mimcs；③阴性对照组:肾小管上皮细胞给予AngⅡ(10-7 mol/L)诱导,同时转染随机合成NC microRNA片段.用流式细胞仪技术检测转染率,用实时定量PCR检测转染效果,运用Western Bolt技术和实时定量PCR技术分别检测各组中TGF-β、α-SMA和Col Ⅰ的表达量.结果:实时定量PCR检测SHR大鼠肾脏皮质组织miR-29b的表达(0.76±0.01)相比WKY大鼠(1.00±0.00)下降(P＜0.05),相比空白对照组(1.00±0.00),AngⅡ组miR-29b的表达(0.56±0.06)明显下降(P＜0.05),TGF-β、α-SMA、Col Ⅰ的mRNA表达和蛋白表达明显升高(P＜0.05).流式细胞仪技术检测NRK-52E细胞转染率为95.14％,相比空白对照组(1.00±0.00),低表达组miR-29b表达(0.07±0.02)明显下降,高表达组miR-29b表达(38.3±8.1)明显升高(P＜0.05).在低表达模型实验中,低表达组α-SMA、TGF-β、Col Ⅰ mRNA表达和蛋白表达比空白对照组和阴性对照组均上调(P＜0.05),而空白对照组和阴性对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).在高表达模型实验中,高表达组的NRK-52E细胞α-SMA、TGF-β、Col I的mRNA表达和蛋白表达比空白对照组和阴性对照组均下调(P＜0.05),而空白对照组和阴性对照组间差异无统计学意义(P＞ 0.05).结论:SHR大鼠肾脏皮质组织miR-29b的表达水平比WKY大鼠下降,这可能和SHR大鼠体内的高AngⅡ水平有关,miR-29b表达降低能促进肾小管上皮细胞发生EMT,AngⅡ调节肾小管上皮细胞发生EMT的一个潜在的机制可能是通过miR-29b来实现的.