复制缺陷型BmNPV载体的构建及初步应用

• 作者: 于威 吕正兵 张耀洲 梅文枫 费伟强 边腾飞 陈倩 陈健 陈琴
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 家蚕杆状病毒穿梭载体 Red重组 复制缺陷型 转染 正筛选
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 514-521
• 页数: 8页
• 分类号: Q782
• 语种: 中文

摘要

家蚕核型多角体病毒(BmNPV)表达载体系统可以利用线性化技术或通过Bac-to-Bac系统构建重组病毒.为了解决采用这些方法构建重组病毒需要多步克隆和筛选,无法满足实验室水平快速和高通量表达目的蛋白质需求的问题,建立了一种快速便捷的重组病毒构建方法.首先以BmNPV基因组为基础构建家蚕杆状病毒穿梭载体BmBacmid,进而利用Red重组技术敲除病毒复制必需基因orfl629的部分序列,构建了一种复制缺陷型BmNPV穿梭载体RD-BmBacmid.利用RD-BmBacmid单独转染或者与pBacPAK8-AcGFP共转染BmN细胞,证实了该载体的复制缺陷性,即需经同源重组修复orf1629基因后方可产生重组病毒.利用复制缺陷型BmNPV载体正筛选可以快速构建重组病毒表达目的蛋白质.