转录因子Pax-8基因干扰后线粒体功能对心肌细胞凋亡的影响

• 作者: 周希 戴晓春 杨德业 林素 王良国 黄晓燕
• 来源期刊: 中华心血管病杂志
• 关键词: 肌细胞,心脏 细胞凋亡 线粒体 转录因子
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 54-59
• 页数: 6页
• 字数: 5446字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-3758.2013.01.012

摘要

目的 采用RNA干扰技术选择性下调大鼠心肌细胞中转录因子Pax-8的表达,引起线粒体功能的变化,借此探讨线粒体对心肌细胞凋亡的影响.方法 将H9C2(2-1)大鼠胚胎心肌细胞分为3组:实验组[针对Pax-8基因的小干扰RNA(Pax-8 siRNA)组],阴性对照组[非特异性siRNA(NC siRNA)组]和空白对照组(BC siRNA组).荧光分光光度法检测半胱天冬酶(caspase-3)活性以反映细胞凋亡,RT-PCR测定B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl2)和其同源类似物Bax的mRNA表达,Western blot测定Bcl2、Bax和胞浆细胞色素C(Cyto)的蛋白表达,流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位(△ψm,用JC-1单体/聚合物比值来衡量线粒体去极化的比例,比值越大,△ψm越低).结果 Pax-8 siRNA组心肌细胞caspase-3活性(0.167 ±0.012)明显高于NC siRNA组(0.075 ±0.021)和BC siRNA组(0.072 ±0.019),P均＜0.05.Pax-8 siRNA组Bcl2 mRNA和蛋白的表达水平(分别为0.61 ±0.06和0.94±0.11)明显低于NC siRNA组(分别为0.90±0.070和1.39±0.15)和BC siRNA组(分别为0.94±0.09和1.49 ±0.20),P均＜0.05.Pax-8 siRNA组Bax mRNA和蛋白表达水平(分别为1.05±0.10和1.25±0.12)明显高于NC siRNA组(分别为0.72 ±0.03和0.99 ±0.12)和BC siRNA组(分别为0.64±0.03和0.92±0.06),P均＜0.05.Pax-8 siRNA组心肌细胞线粒体释放Cyto至胞浆的量(0.75±0.14)明显高于NC siRNA组(0.51±0.06)和BC siRNA组(0.48±0.07),P均＜0.05.Pax-8 siRNA组JC-1单体/聚合物比值(0.163±0.011)明显高于NCsiRNA组(0.092 ±0.015)和BC siRNA组(0.072±0.025),P均＜0.05,提示△ψm明显低于NCsiRNA组和BC siRNA组(P均＜0.05).NC siRNA组与BC siRNA组上述指标比较,差异均无统计学意义.结论 Pax-8基因干扰心肌细胞,促进了心肌细胞的凋亡,线粒体参与了心肌细胞凋亡,推测心肌细胞的凋亡可能是通过线粒体途径实现的.