南极衣藻谷胱甘肽-S-转移酶基因的表达及其对大肠杆菌低温耐受性的增强作用

• 作者: 丁燏 刘莹 彭跃跃 王金慧 简纪常 鲁义善
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 南极衣藻 谷胱甘肽-S-转移酶 表达 低温
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 页码范围: 16-21
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 5337字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7541/2013.16

摘要

谷胱甘肽-S-转移酶(Glutathione-S-transferase,GST,EC2.5.1.18)是生物体内一种重要的抗氧化酶,为阐明GST在南极衣藻(Chlamydomonas sp.ICE-L)中的具体地位,采用实时荧光定量PCR对不同温度下南极衣藻的GST基因的表达进行了分析; 并构建了原核表达载体pET28a(+)-GST,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,通过平板培养法探讨了重组菌E.coli BL21(pET28a(+)-GST)对低温胁迫的耐受性.结果显示,GST在0℃时表达量最高,最高可达对照组的两倍多; pET28a(+)-GST重组表达载体在E.coli BL21中实现了高效表达,且主要以包涵体形式存在,经HisTrap HP柱分离纯化获得高纯度的GST融合蛋白,并通过SDS-PAGE及Western blot分析得以验证; 对低温胁迫实验发现南极衣藻GST蛋白的表达可以提高重组菌E.coli BL21对低温的耐受性,说明GST基因对南极衣藻适应南极低温环境具有重要作用.