马克斯克鲁维酵母羰基还原酶基因的克隆与表达

• 作者: 应国清 易喻 杨岳微 梅建凤 金志华
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 羰基还原酶 马克斯克鲁维酵母 不对称还原
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 基因克隆及功能研究
• 页码范围: 1393-1402
• 语种: 中文

摘要

[目的]研究羰基还原酶基因的克隆、表达及其在不对称生物催化中的应用.[方法]对羰基还原酶氨基酸序列进行BLAST推导出核苷酸序列,设计引物,以马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyce marxianus) CGMCC 2.1977全基因组为模板,通过PCR扩增目的片段,与载体pET-28a连接,转化大肠杆菌获得重组菌BL21 (DE3)-(pET28a-cMCR)和Rosetta(DE3)-(pET28a-cMCR).[结果]扩增的序列与已报道的mer序列有100％同源性,全长1 038 bp,共编码345个氨基酸.目的蛋白在Rosetta(DE3)-(pET28a-cMCR)得到了高效表达,大小为42 kD.该酶最适反应温度为40℃,最适反应pH是8,热稳定性与pH稳定性较差.Ca2+对酶活具有明显的激活作用,且浓度为0.5 mmol/L时效果最好.重组菌可还原4-氯乙酰乙酸乙酯(COBE)为(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯[(S)-CHBE],光学纯度为100％,转化率为81.0％.重组菌在制备度洛西汀关键中间体(S)-氮,氮-二甲基-3-羟基-(2-噻吩)-1-丙胺[(S)-DHTP]中也得到初步应用.[结论]从菌株马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyce marxianus) CGMCC 2.1977中克隆获得了羰基还原酶基因,在大肠杆菌中成功表达,并可应用于不对称还原.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	应国清	浙江工业大学药学院	96	996	17.0	27.0
2	易喻	浙江工业大学药学院	75	766	15.0	25.0
3	梅建凤	浙江工业大学药学院	62	507	13.0	19.0
4	金志华	浙江大学宁波理工学院生物与化学工程学院	49	483	14.0	20.0
5	杨岳微	浙江工业大学药学院	1	2	1.0	1.0