酶切过程中肽段过烷基化对蛋白质定性和定量分析的影响

• 作者: 应万涛 王继峰 赵新元 赵焱 钟儒刚 钱小红 马成
• 来源期刊: 色谱
• 学科: 化学
• 关键词: 液相色谱 质谱 多反应监测 蛋白质组学 烷基化 碘乙酰胺
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 927-933
• 页数: 7页
• 分类号: O658
• 字数: 6000字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1123.2013.04041

摘要

蛋白质的还原-烷基化是蛋白质酶切中的重要步骤,常用的烷基化试剂是碘乙酰胺(IAA),但是IAA除了和半胱氨酸发生反应,也可能和其他多种氨基酸发生副反应.我们模拟常规的酶切条件,系统地研究了蛋白质真实酶切时所有酶切肽段发生烷基化的情况.结果表明,多种氨基酸可以发生烷基化,其趋势为:半胱氨酸＞肽段N端氨基酸＞天冬氨酸＞谷氨酸＞组氨酸＞天冬酰胺＞赖氨酸＞酪氨酸,同时也发现同一肽段上的氨基酸烷基化具有排他性和聚集性.根据定性结果,采用质谱多反应监测(MRM)技术对多个肽段进行了定量分析,评估了过烷基化对蛋白质定量分析的影响.该研究结果表明,过量的烷基化修饰对蛋白质的定性与定量分析都可能产生较大影响.在蛋白质组学研究的样本处理流程中,应避免样本的过烷基化.