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摘要:
根据克隆得到的迟缓爱德华氏菌gyrB基因序列设计并合成一对特异性引物,通用性和特异性检测结果显示所设计的引物具有良好的种间特异性和种内通用性,构建含gyrB基因的重组质粒作为标准品,经过反应体系优化后建立了检测迟缓爱德华氏菌的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法.结果显示,该方法线性关系良好,在Tm为63℃时,扩增产物的熔解曲线仅有一个单特异峰,扩增所得标准曲线为y=-3.32x +39.38,相关系数为0.998,扩增效率为1.00,最低能检测到60个拷贝.应用建立的方法对人工感染的大菱鲆病样进行了检测,3个被检样品均呈阳性反应,证明该方法具有较好的适用性.研究表明,所建立的实时荧光定量PCR方法具有特异、敏感、快速、定量的优点,可用于迟缓爱德华氏菌病的快速检测.
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文献信息
篇名 迟缓爱德华氏菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及其应用
来源期刊 水产学报 学科 农学
关键词 迟缓爱德华氏菌 gyrB基因 实时定量PCR SYBR Green Ⅰ
年,卷(期) 2013,(12) 所属期刊栏目
研究方向 页码范围 1829-1838
页数 分类号 Q785|S941.42
字数 语种 中文
DOI 10.3724/SP.J.1231.2013.38798
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研究主题发展历程
节点文献
迟缓爱德华氏菌
gyrB基因
实时定量PCR
SYBR Green Ⅰ
研究起点
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引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
水产学报
月刊
1000-0615
31-1283/S
大16开
上海市临港新城沪城环路999号
4-297
1964
chi
出版文献量(篇)
3756
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英文译名:
官方网址:http://kjzc.jhgl.org/
项目类型:重大项目
学科类型:能源
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