钝齿棒杆菌溶氧诱导型启动子的筛选及其功能验证

• 作者: 张博慧 徐美娟 许正宏 饶志明
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 钝齿棒杆菌 供氧差异 诱导型 启动子
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 遗传和分子生物学
• 页码范围: 933-942
• 分类号: Q933
• 语种: 中文

摘要

[目的]筛选钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)SYPA5-5内源溶氧诱导型启动子,验证其在不同溶氧条件下受溶氧调控的功能.[方法]以本课题组前期利用双向电泳结合质谱鉴定技术分离鉴定出的高低供氧条件下钝齿棒杆菌SYPA5-5胞内的显著差异蛋白(27个)为基础,结合棒杆菌基因组信息分析高低溶氧状态下显著差异蛋白中单位拷贝的表达量,以其中单位拷贝表达量高的蛋白为目的蛋白,克隆目的蛋白编码基因的上游启动子,分别替换棒杆菌-大肠杆菌穿梭表达质粒pDXW-8的外源tac启动子,在大肠杆菌和钝齿棒杆菌中表达报告基因gfp和cat,并检测其表达效率.[结果]筛选出高溶氧上调蛋白转酮醇酶和延胡索酸水化酶作为目的蛋白,克隆其启动子区命名为P-tkt和P-fum.在重组大肠杆菌和重组钝齿棒杆菌中,P-tkt在高溶氧条件下CAT活性是低溶氧条件下CAT活性的2.8和3.2倍.该结果在5L发酵罐中得到验证.[结论]启动子P-tkt为首次筛选到的钝齿棒杆菌内源性高溶氧诱导型启动子,适用于高溶氧条件发酵生产氨基酸的菌株中,有利于在高供氧条件下提高棒杆菌中氨基酸的合成代谢能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	饶志明	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	107	599	12.0	20.0
2	许正宏	江南大学药学院制药工程实验室	241	1740	20.0	30.0
3	徐美娟	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	51	125	6.0	9.0
4	张博慧	江南大学工业生物技术教育部重点实验室	1	3	1.0	1.0