大豆花叶病毒HC-Pro基因保守序列克隆及其RNAi载体的构建

• 作者: 宋英培 智海剑 李凯 沈颖超 章红运 翟锐 高乐
• 来源期刊: 大豆科学
• 学科: 农学
• 关键词: 大豆花叶病毒 HC-Pro基因 克隆 RNAi GATEWAY技术 载体构建
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 遗传育种·分子生物学
• 页码范围: 744-749
• 分类号: S565.1
• 语种: 中文

摘要

大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)病是全球最主要的大豆病害之一,严重危害大豆的产量和品质.RNA干扰(RNA interference,RNAi)能够在mRNA水平特异性沉默同源靶基因,为抗病毒作物的培育提供了新的途径.本研究对国内外11个不同SMV流行株系的HC-Pro基因进行了核苷酸序列比对,并以SC3株系的cDNA为模板克隆出高度保守的268 bp的基因片段,进而利用GATEWAY技术构建了适合农杆菌介导大豆转化的RNAi表达载体pB7 GWIWG2 (Ⅱ)-HC-Proi.并对BP反应和LR反应的纯化产物进行了测序鉴定,测得序列在NCBI上进行比对,匹配度为100％;以35S启动子和终止子设计引物,扩增得到464和478 bp两个片段,说明HC-Proi基因与pB7GWIWG2(Ⅱ)重组形成反向重复结构,载体构建成功.结果为利用RNA干扰技术改良大豆对大豆花叶病毒的抗性奠定了基础.