睡美人转座子真核表达载体的构建及在猪胎儿成纤维细胞系中的表达验证

• 作者: 周家庆 宋成义 崔文涛 李奎 李碧春 牟玉莲 王升智 钱丽丽 高波
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 睡美人(sleeping beauty,SB) 真核表达载体 转基因动物
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 684-689
• 页数: 6页
• 字数: 4169字
• 语种: 中文

摘要

睡美人(sleeping beauty,SB)是Tc1/mariner转座子超家族的一员,为探索睡美人转座子与不同的转座酶搭配使用及与同种转座酶不同比例搭配使用时的转座效率,本实验构建了SB真核表达重组载体PT2-SV40-EGFP,通过荧光显微镜和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测进行了猪胎儿成纤维细胞系(PEFs)转染条件优化研究.研究结果表明,不同转座酶与转座子按10∶1混合后细胞转染效率相似,但报告基因表达水平有较大差异,其中SB 100X转座酶与转座子混合后细胞的表达水平最高；转座子PT2-SV40-EGFP质粒和SB 100X转座酶质粒按不同比例混合转染细胞研究表明,细胞转染效率相似,但表达水平存在显著差异,其中1∶1组最高,约是5∶1组和10∶1组的50倍.本实验优化了睡美人转座子的转座条件为制备转基因动物深入研究提供参考.