润楠ISSR-PCR优化反应体系建立及引物筛选

• 作者: 刘玉香 宋晓琛 江香梅
• 来源期刊: 林业科技开发
• 关键词: 润楠 ISSR 体系优化 引物筛选
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 应用研究
• 页码范围: 24-28
• 页数: 5页
• 字数: 3976字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8101.2013.05.006

摘要

以润楠基因组总DNA为材料,利用单因素试验设计方法,对影响ISSR-PCR扩增的模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶以及去离子甲酰胺等试验因子进行了优化试验,筛选出16条有效引物并确定了它们的退火温度,并检测了体系的重复性.优化后的反应体系为:20 μL PCR反应体积中,10×PCR Buffer 2μL,2.0mmol/L Mg2+ 1.6 μL,0.2 mmol/L dNTPs 2 μL,0.4 mmol/L 引物0.8 μL,0.5U Taq DNA聚合酶0.1 μL,40 ng DNA模板1.0μL,1.5％去离子甲酰胺0.3 μL,ddH2O 12.2 μL.扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,据不同引物的退火温度复性45 s,72℃延伸90 s,反应37个循环,最后在72℃延伸7 min.润楠ISSR-PCR反应体系的建立为利用ISSR分子标记技术研究润楠的遗传多样性奠定了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	江香梅	江西农业大学园林与艺术学院	100	1183	20.0	29.0
5	刘玉香	江西农业大学园林与艺术学院	4	18	2.0	4.0
6	宋晓琛	江西省林业科学院国家林业局樟树工程技术研究中心	14	52	5.0	6.0