miR-135a对卵巢上皮性癌细胞中HOXA10基因表达及细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 万一聪 万贵平 张林 汤伟伟 程文俊
• 来源期刊: 中华妇产科杂志
• 关键词: 微RNAs 卵巢肿瘤 细胞系,肿瘤 同源盒结构域蛋白质类 细胞增殖 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 364-369
• 页数: 6页
• 字数: 5793字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-567x.2013.05.010

摘要

目的 研究微小RNA-135a(miR-135a)对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞系SKOV3细胞中HOXA1O基因表达及细胞增殖和凋亡的影响.方法 (1)应用生物信息学技术预测与miR-135a高度相关的靶基因(即HOXA10基因).(2)将miR-135a成熟体模拟物(mimics)、miR-135a成熟体抑制物(inhibitor)及阴性对照分别转染SKOV3细胞,采用逆转录(RT)-PCR技术和蛋白印迹法检测转染不同时间(分别为24、48和72 h)后SKOV3细胞中HOXA10 mRNA和蛋白的表达水平.(3)报告基因实验验证miR-135a对HOXA10基因表达的调节作用,采用含miR-135a的质粒和含HOXA10基因的重组质粒共同转染SKOV3细胞,以转染微小RNA (miRNA)慢病毒质粒者为对照.(4)采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测转染不同时间(分别为24、48和72 h)后SKOV3细胞的增殖能力[以吸光度(A)值表示],蛋白印迹法检测转染48 h后SKOV3细胞中凋亡相关蛋白[包括bcl-2、bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)]的表达.结果 (1)生物信息学技术预测,得出与miR-135a高度相关的靶基因为HOXA10基因.(2)RT-PCR技术检测显示,随着转染时间的延长(分别为24、48和72 h),miR-135a mimics转染后SKOV3细胞中HOXA10 mRNA的表达水平(分别为0.94±0.04、0.78 ±0.03、0.70±0.03)逐渐降低(P＜0.05)；miR-135a inhibitor转染后SKOV3细胞中HOXA10 mRNA的表达水平(分别为1.14 ±0.05、1.16 ±0.03、2.60±0.08)逐渐升高(P＜0.05)；且两者转染48及72 h后,分别与阴性对照(为1.00)比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).蛋白印迹法检测显示,转染不同时间后SKOV3细胞中HOXA10蛋白的表达水平与HOXA10 mRNA的变化一致.(3)报告基因实验显示,含miR-135a的质粒和含HOXA10基因的重组质粒共同转染SKOV3细胞后,与对照比较,其荧光素酶活性下降了67.8％ (P ＜0.01).(4) MTT比色法检测显示,miR-135amimics转染48和72 h后SKOV3细胞的增殖能力(,4值分别为0.38±0.03、0.67 ±0.05),明显低于阴性对照(A值分别为0.52 ±0.05、0.75 ±0.06;P ＜0.05)；miR-135a inhibitor转染72 h后SKOV3细胞的增殖能力(A值为0.95±0.05),明显高于阴性对照(A值为0.75 ±0.06;P ＜0.01).蛋白印迹法检测显示,miR-135a mimics转染后SKOV3细胞中bcl-2蛋白表达水平(0.28±0.06)明显低于阴性对照(0.76±0.09；P ＜0.01);bax蛋白表达水平无明显变化(P=0.142)；caspase-3酶活性(115.0±2.4)明显高于阴性对照(95.4 ±2.1;P＜0.01).miR-135a inhibitor转染后SKOV3细胞中bcl-2蛋白表达水平(0.92±0.03)明显高于阴性对照(0.76 ±0.09;P =0.037)；bax蛋白表达水平无明显变化(P=0.066);caspase-3酶活性(59.5±4.1)明显低于阴性对照(95.4±2.1;P＜0.01).结论 miR-135a通过HOXA10基因及其下游通路中凋亡相关蛋白影响卵巢癌细胞的增殖和凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	万贵平	江苏省中西医结合医院妇产科	54	294	9.0	14.0
2	张林	南京医科大学第一附属医院妇科	30	112	6.0	8.0
3	程文俊	南京医科大学第一附属医院妇科	36	143	7.0	10.0
4	汤伟伟	江苏省中西医结合医院妇产科	13	28	3.0	4.0
5	万一聪	南京医科大学第一附属医院妇科	7	34	3.0	5.0