HBV基因组A1846T变异对病毒复制力及核心启动子活性的上调作用研究

• 作者: 刘妍 姚伟明 徐东平 戴久增 李晓东 李韦杰 江玲 许智慧 辛绍杰
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,乙型 肝功能衰竭 突变 启动区 DNA复制
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 10-14
• 分类号: R512.62
• 语种: 中文

摘要

目的 评价乙肝病毒(HBV)基因组核苷酸(nt)A1846T变异对病毒体外复制力及核心启动子(CP)转录活性的影响.方法 385例研究对象包括116例轻中度慢性乙肝(CHB-M)患者,123例重度慢性乙肝(CHB-S)患者和146例慢加急性肝衰竭(ACLF)患者.从患者血清中提取HBV DNA,PCR扩增HBV全长基因组,统计A1846T变异的发生率.挑选代表性A1846T变异株HBV全长序列克隆至pGEM-Teasy载体中,并通过定点突变获得野生型对照.BspQⅠ/ScaⅠ双酶切HBV基因组,转染HepG2细胞,检测病毒复制力和HBsAg表达水平；用PCR分别扩增含nt1846变异型和野生型的HBVCP区片段,构建pGL3-CP双荧光素酶真核报告表达载体,转染HepG2细胞,分析检测A1846T变异对荧光素酶表达的影响.结果 HBV A1846T变异发生率随疾病程度加重依次增高,CHB-M、CHB-S和ACLF患者的变异检出率分别为31.03％、42.27％和55.48％(P＜0.01).A1846T变异株的复制力、分泌的HBsAg水平和核心启动子活性较野生株分别提高了320％、28％和85％,常见的CP区A1762T/G1764A双联变异株分别较野生株提高了67％、9％和72％,A1846T变异对提高病毒复制力的影响更强.结论 A1846T变异可显著增加HBV复制力,提高HBsAg表达水平,增强启动子活性,顺式激活下游基因转录表达,提示该变异可能与慢性乙肝重症化发生机制相关.