miRNA-122促进小鼠胚胎干细胞源性肝前体细胞的分化与成熟

• 作者: 伍耀豪 周嘉嘉 唐晶 张杰 曾乐祥 李治熹 邓小耿 邓洁敏 邱荣林
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胚胎干细胞 肝细胞 miRNA-122
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1260-1267
• 页数: 8页
• 分类号: R363
• 字数: 5992字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2013.07.021

摘要

目的:通过miRNA-122 (miR-122)转染胚胎干细胞(ESCs)源性肝前体细胞,观察及评估其是否能推进ESCs向肝细胞的分化过程.方法:采用丁酸钠、成纤维细胞生长因子4(FGF-4)及地塞米松(Dex)联合序贯诱导小鼠ESCs使之初步分化为肝前体细胞,然后利用Gateway技术构建出pAV.Ex1d-CMV＞ miR122/IRES/eGFP重组腺病毒表达载体,使其转染贴壁诱导第9天的小鼠ESCs源性肝前体细胞,获得稳定高表达miR-122的细胞后继续培养.采用荧光显微镜观察转染后细胞形态的变化；使用real-time RT-PCR检测肝特异性基因的表达；免疫荧光检测肝特异性蛋白表达水平；吲哚氰绿摄取实验、糖原染色及尿素合成功能实验检测肝细胞功能.结果:丁酸钠、FGF-4及Dex联合序贯诱导可将小鼠ESCs成功地诱导为肝前体细胞.转染miR-122后,细胞在形态学上更接近成熟肝细胞；肝特异性基因白蛋白(ALB)、甲状腺素运载蛋白、α1抗胰蛋白酶、葡萄糖-磷酸酶、细胞角蛋白8、胆固醇7α-羟化酶及细胞色素P450 3A4的mRNA表达均增高；肝特异性蛋白ALB及细胞角蛋白18均表达增高,而甲胎蛋白表达降低；吲哚氰绿摄取实验、糖原染色及尿素合成功能实验结果均显示转染miR-122后肝细胞功能较对照组明显增强.结论:丁酸钠、FGF-4及Dex联合序贯诱导可将小鼠ESCs成功地诱导为肝前体细胞；miR-122能够有效地促进小鼠肝前体细胞的分化与成熟.