正交设计优化广西火桐ISSR-PCR反应体系

• 作者: 代文娟 唐文秀 盘波 符支宏 赵博 马虎生 骆文华 黄仕训
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 广西火桐 正交设计 优化
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 78-82
• 语种: 中文

摘要

以广西火桐DNA为模板,利用正交试验分别对ISSR-PCR反应的MgCl2浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶浓度、模板DNA浓度进行了优化,并通过梯度PCR确定最佳退火温度和循环次数,最终确定广西火桐最佳反应体系及扩增条件.25μL体系中1×PCR buffer,2.5 mmol/L MgCl2,0.15 mmol/L dNTPs,0.06 U/μL Taq DNA聚合酶,3 ng/μL DNA模板,0.2 μmol/L引物;最佳扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性45 s,52℃退火45s,72℃延伸1.5 min,共30个循环;72℃最后延伸7min.扩增后的PCR产物在4℃保存.应用该ISSR体系对10个广西火桐样品进行了扩增,证实了该体系的适用性和稳定性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵博	中国科学院广西植物研究所	29	224	8.0	14.0
2	唐文秀	中国科学院广西植物研究所	17	171	9.0	12.0
3	骆文华	中国科学院广西植物研究所	16	190	10.0	13.0
4	马虎生	中国科学院广西植物研究所	5	20	3.0	4.0
5	符支宏	中国科学院广西植物研究所	3	9	2.0	3.0
9	代文娟	中国科学院广西植物研究所	3	21	3.0	3.0
10	盘波	中国科学院广西植物研究所	10	79	4.0	8.0