Gateway技术构建小鼠血管生成素-1慢病毒表达载体及其病毒包装

• 作者: 封志纯 张小英 李秋平 王春枝 章晟 许靖 马新娜
• 来源期刊: 临床儿科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血管生成素-1 慢病毒 载体 Gateway技术
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 866-870
• 页数: 5页
• 分类号: R322
• 字数: 3774字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-3606.2013.09.017

摘要

目的构建携带小鼠血管生成素-1（Ang-1）基因的慢病毒载体并进行慢病毒包装。方法利用Gateway技术构建携带DsRed荧光蛋白的Ang-1慢病毒载体，经PCR及基因测序鉴定后，与辅助质粒pLV/helper-SL3、pLV/helper-SL4及pLV/helper-SL5混合采用脂质体法制备DNA-Lipofectamine 2000复合物，并共同转染293FT细胞进行慢病毒包装，产生相应慢病毒颗粒，通过荧光表达情况来测定病毒滴度和感染效率。结果通过PCR、基因测序证实，Ang-1慢病毒表达载体PLV.Ex3d.P/puro-CMV>Ang-1>IRES/DsRed-Express2构建成功。经转染293FT细胞包装出具高效感染力的慢病毒，经测定病毒滴度为5×108 TU/ml。结论成功构建Ang-1慢病毒表达载体，并包装出具高效感染力的慢病毒颗粒，为进一步研究Ang-1基因功能及基因治疗提供实验基础。