联合转染A20、HO-1基因对大鼠胰岛抗凋亡能力影响的研究

• 作者: 徐虹 支涤静 沈水仙 罗飞宏 郭礼和 陆忠
• 来源期刊: 中华儿科杂志
• 关键词: 胰岛 血红素加氧酶1 基因 转染 凋亡
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 内分泌遗传代谢疾病研究
• 页码范围: 420-425
• 页数: 6页
• 字数: 5813字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0578-1310.2013.06.006

摘要

目的 研究A20基因、血红素加氧酶1基因(heme oxygenase 1 gene,HO-1)转染在大鼠胰岛细胞中的表达情况及对体外培养条件下胰岛活性、拮抗放线菌酮(CHX)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的胰岛细胞凋亡作用的影响.方法 构建A20、HO-1和增强绿色荧光蛋白(EGFP)慢病毒转移载体,荧光显微镜连续观察EGFP表达情况,评估转基因效率、确定诱导凋亡时机.Western印迹测定A20和HO-I蛋白表达.超敏ELISA试剂盒检测胰岛素浓度.胰岛经CHX+ TNF-α处理48 h进行TUNEL、流式细胞仪检测凋亡率.Western印迹检测半胱氨酸蛋白酶-3的活化.结果 (1)分别以A20和HO-1慢病毒转染胰岛检测表明A20和HO-1蛋白均呈高表达.(2)胰岛细胞经培养48h和96 h,转基因各组胰岛素浓度高于空白对照组(P＜0.01).(3)CHX+ TNF-α诱导胰岛细胞凋亡后,转A20组胰岛素浓度为(93.58 ±4.12) μg/ml、转HO-1组胰岛素浓度为(88.98±4.77) μg/ml,联合转A20和HO-1组胰岛素浓度(103.33 ±3.16) μg/ml,均高于转EGFP组[(9.03±0.65) μg/ml]和空白对照组[(8.86±0.38) μg/ml,P＜0.001].Western印迹法检测显示联合转A20/HO-1基因组活化型半胱氨酸蛋白酶-3表达水平最低.结论 原代胰岛细胞中高效表达的A20和HO-1蛋白具有抗CHX+ TNF-α诱导的胰岛凋亡作用,联合转A20和HO-1基因有协同抗凋亡效应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐虹	复旦大学附属儿科医院肾内科	179	857	15.0	19.0
2	罗飞宏	复旦大学附属儿科医院内分泌遗传代谢科	81	446	10.0	18.0
3	沈水仙	复旦大学附属儿科医院内分泌遗传代谢科	44	365	11.0	18.0
4	支涤静	复旦大学附属儿科医院内分泌遗传代谢科	18	230	8.0	15.0
5	陆忠	复旦大学附属儿科医院内分泌遗传代谢科	9	146	4.0	9.0
6	郭礼和	中国科学院上海生化细胞研究所	66	392	11.0	16.0