穿膜肽介导的新型基因转运载体的功能研究

• 作者: 于芳 张宏达 绳纪坡 胡宝成 黄君健
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 穿膜肽 LacI前头肽突变体 二聚体 DNA转运
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 782-786
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4268字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2013.06.007

摘要

目的：借助穿膜肽TAT高效跨膜的特性和LacI前头肽突变体（LacI HPM）高亲和力结合DNA的特性，建立一种安全高效、无基因插入片段大小限制的基因转导系统。方法：在TAT-LacI HPM片段C端和N端分别添加GST标签，构建pET-28a（+）-TAT-LacI HPM-GST和pGEX-GST-TAT-LacI HPM重组表达载体，可溶性表达TAT-LacI HPM-GST及GST-TAT-LacI HPM融合蛋白并纯化，获得TAT-LacI HPM二聚体，免疫荧光检测TAT-LacI HPM融合蛋白穿过HeLa细胞膜的情况，观察EGFP的表达，用免疫印迹检测TAT-LacI HPM融合蛋白介导质粒DNA进入细胞的能力。结果：表达、纯化并获得二聚体融合蛋白，体内实验表明其具有跨膜能力，能介导带有LacI结合序列的DNA质粒进入细胞，并在转染细胞里检测到了目的蛋白。结论：初步证实TAT-LacI HPM融合蛋白作为一种新型通用性非病毒DNA转运载体的可行性，为评价这种新型DNA疫苗载体在提高免疫效果方面的可行性奠定了前期实验基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄君健	军事医学科学院生物工程研究所	31	171	4.0	12.0
2	绳纪坡	军事医学科学院生物工程研究所	18	50	4.0	6.0
3	于芳	军事医学科学院生物工程研究所	27	68	5.0	7.0
4	胡宝成	军事医学科学院生物工程研究所	35	154	5.0	11.0
5	张宏达	军事医学科学院生物工程研究所	4	9	2.0	3.0