增强型绿色荧光蛋白的色谱分离和纯化

• 作者: 侯清华 吉爱国 宋淑亮 梁浩 王伟莉
• 来源期刊: 色谱
• 学科: 化学
• 关键词: 金属螯合亲和色谱 凝胶排阻色谱 增强型绿色荧光蛋白 分离 纯化
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与应用
• 页码范围: 151-154
• 页数: 4页
• 分类号: O658
• 字数: 2981字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1123.2012.10004

摘要

增强型绿色荧光蛋白(EGFP)是生物领域常用的标记物.在前期成功克隆表达EGFP的基础上,本实验建立了两步分离纯化EGFP的色谱方法,并验证其分离纯化效果,检验EGFP的活性.首先用金属螯合亲和色谱柱HisTrap HP对EGFP的重组菌体破碎上清液进行初步分离,再用葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephadex G-10 HR对其进行脱盐纯化.采用丙烯葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephacryl S-300 HR和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测分离纯化后的EGFP纯度.最后通过荧光分光检测器和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(NativePAGE)验证分离纯化后的EGFP是否具有荧光活性.结果表明该方法可以简便快速地分离纯化EGFP,纯度超过98％,同时保持了EGFP的荧光活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吉爱国		85	909	16.0	29.0