鼠疫耶尔森菌Ⅲ型分泌系统相关基因的功能研究

• 作者: 崔明全 张婷婷 彭广能 杜宗敏 杨慧盈 谭亚芳 韦娜 韩伟
• 来源期刊: 中华预防医学杂志
• 关键词: 耶尔森菌,鼠疫 基因 毒力 三型分泌系统 蛋白相互作用
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 627-631
• 页数: 5页
• 字数: 3970字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2013.07.011

摘要

目的 研究鼠疫耶尔森菌pCD1质粒上编码的假定蛋白YpCD1.08、YpCD1.09、YpCD1.16与pCD1质粒编码的Ⅲ型分泌系统(T3SS)在功能上的相关性.方法 采用λ-Red重组系统构建鼠疫耶尔森菌YpCD1.08、YpCD1.09、YpCD1.16基因的突变株,通过测定分别培养于26℃下有钙、37℃下无钙和有钙TMH培养基中的以上3种突变菌株及野生菌株的生长曲线,分析突变菌株的低钙响应情况；在26℃和37℃条件下分别培养鼠疫菌突变菌株,并提取总RNA,采用定量PCR分析3种基因的转录水平及其对温度的依赖性；用β-内酰胺酶报告分子的方法分析3种基因的突变对效应蛋白转运的影响.结果 在26℃和37℃低钙培养条件下,突变菌株△YpCD1.08、△YpCD1.09、△YpCD1.16的生长曲线与野生型菌株一致,表明其低钙响应正常.YpCD1.08、YpCD1.09、YpCD1.16基因在37 ℃与26℃转录水平的比值分别为2.3±0.3、2.3±0.5、3.2±0.7,表明这3个基因在鼠疫菌中均有转录,且其转录水平受温度调控,与T3SS基因转录水平的温度依赖性一致.β-内酰胺酶报告分子实验结果表明,突变菌株△YpCD1.08在140 min时477与520 nm波长的发光强度的比值为2.5,而野生型菌株仅为1.8,表明△YpCD1.08菌株对YopE的转运能力要高于野生株,而其他两个突变株与野生株类似.结论 YpCD1.08、YpCD1.09、YpCD1.16基因有可能是T3SS的新成员,假定蛋白YpCD1.08可能参与效应蛋白YopE的转运及其调控.