TK/GCV系统联合顺铂对骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用研究

• 作者: 吕智 马卓
• 来源期刊: 中国骨与关节杂志
• 学科: 医学
• 关键词: TK 基因转染 骨肉瘤 丙氧鸟苷(GCV) 顺铂(cDDP)
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 页码范围: 95-99
• 分类号: R363|R738.1
• 字数: 4232字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-252X.2013.02.008

摘要

目的研究脂质体介导的包含TK基因的质粒pIRES-EGFP-tk在GCV作用下(TK/GCV系统)联合化疗药物顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用.方法构建重组质粒pIRES-EGFP-tk,制备和转化感受态大肠杆菌BL21及鉴定测序,培养和转染人骨肉瘤MG-63细胞株,流式细胞仪分析和荧光倒置显微镜下观察细胞生长状态,筛选稳定细胞系,MTT法检测GCV与不同浓度顺铂联合应用对骨肉瘤MG-63细胞株生长的抑制作用.结果成功构建含TK基因cDNA片段的重组质粒pIRES-EGFP-tk,通过PCR、酶切电泳等方法鉴定质粒位点和大小均符合实验设计.将重组质粒pIRES-EGFP-tk转染入人骨肉瘤MG-63细胞株,获得稳定表达.荧光显微镜下观察MG-63(tk+)呈现绿色荧光.流式细胞仪检测转染率为67.7%.通过MTT法检测,当GCV浓度为10μg/ml时,骨肉瘤MG-63(tk+)细胞株的生长受到抑制,同时测得顺铂的最低有效浓度为1μg/ml.当顺铂与GCV (5μg/ml)联合应用时,顺铂的有效浓度可降为0.25μg/ml,并对MG-63(tk+)细胞株有明显的抑制作用.结论 TK/GCV系统联合顺铂可对人骨肉瘤MG-63细胞的生长产生抑制作用,并提高MG-63细胞对顺铂的敏感性,降低其有效剂量.可望为骨肉瘤的辅助治疗提供实验依据.