siat7e基因和st3galⅠ基因双表达载体的构建及其初步应用

• 作者: 张启龙 张敏 王栋 王磊 蒋桃珍 陈小云
• 来源期刊: 中国兽药杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: siat7e基因 st3gal Ⅰ基因 表达载体 MDCK细胞
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 微生物与免疫
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 分类号: Q785
• 字数: 4270字
• 语种: 中文

摘要

应用聚合酶链式反应(PCR)技术,从人类基因组中扩增出全长为1011 bp的唾液酸转移酶(siat7e基因),并从鸡基因组中扩增出全长为1029 bp的β-半乳糖苷α-2,3-唾液酸转移酶Ⅰ(ST3 GAL Ⅰ)基因.将它们分别克隆入pMD18-T载体中.对扩增的全长siat7e基因序列采用BamH Ⅰ和PstⅠ双酶切后连接入pReceiver真核表达载体,构建pRE-SIAT重组表达载体,进而,对扩增的全长st3gal Ⅰ基因采用Sac Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切,后连接入pRE-SIAT重组表达载体,构建pRE-SIAT-ST3重组真核表达载体.经限制性内切酶消化及DNA序列分析,证实构建的重组表达质粒是正确的.将构建的双基因表达载体转染MDCK细胞,利用荧光显微镜观察,可见细胞表达明显的绿色荧光,从而初步证实了外源基因在MDCK细胞中的正确表达.本研究为最终构建能够适应悬浮培养,并且对禽流感病毒更为易感的MDCK细胞系奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈小云		25	144	6.0	11.0
2	蒋桃珍		50	160	6.0	9.0
3	张敏		15	55	5.0	6.0
4	王磊		7	13	2.0	3.0
5	王栋		35	179	8.0	12.0
6	张启龙		3	6	1.0	2.0