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摘要:
筛选稳定表达鸡ST3Gal工基因的BHK-21细胞株,为进一步研究禽流感病毒大规模细胞培养生产疫苗奠定基础.克隆鸡ST3GalⅠ基因并将其插入真核表达质粒pcDNA3.1-EGFP中构建重组质粒pcDNA3.1-EGFP-ST3GaⅠ,鉴定正确的真核表达载体转染BHK-21细胞后,ST3GalⅠ基因在细胞中稳定表达,经G418抗性和RT-PCR筛选鉴定表达阳性的单克隆细胞株.将H9亚型禽流感病毒和H5N1 Re-5禽流感病毒按不同比例接种BHK-21-ST3GalⅠ细胞和空白BHK-21细胞,同时设普通胰酶和TPCK-胰酶对照组以检测BHK-21-ST3Gal Ⅰ细胞对H9亚型禽流感病毒和H5N1 Re-5禽流感病毒的增殖效果.接毒72 h后收获细胞液,常规方法测定血凝素(HA)滴度.通过在BHK-21细胞中稳定表达ST3GalⅠ基因,提高BHK-21细胞表面SAα-2,3Gal受体丰度连续传6代后仍然能检测到其表达,荧光显微镜下能看到绿色荧光,RT-PCR可检出1029 bp的目的条带.结果显示,BHK-21-ST3GalⅠ细胞在接毒量为2%时HA滴度达到1∶256,显著高于空白BHK-21细胞组,表明其更适于流感病毒的增殖,具备生产流感病毒疫苗的潜力.
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关键词云
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文献信息
篇名 稳定表达鸡ST3GALⅠ基因BHK-21细胞株的建立
来源期刊 动物医学进展 学科 生物学
关键词 ST3GALⅠ基因 重组质粒 稳定表达 BHK-21细胞
年,卷(期) 2013,(3) 所属期刊栏目 研究论文
研究方向 页码范围 10-15
页数 6页 分类号 Q813.11
字数 4816字 语种 中文
DOI
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 高轩 河北农业大学动物科技学院 24 232 9.0 14.0
2 李明义 12 50 3.0 6.0
3 陈欢 河北农业大学动物科技学院 2 5 2.0 2.0
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研究主题发展历程
节点文献
ST3GALⅠ基因
重组质粒
稳定表达
BHK-21细胞
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
动物医学进展
月刊
1007-5038
61-1306/S
大16开
陕西杨陵西北农林科技大学动物医学院
52-60
1980
chi
出版文献量(篇)
7631
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22
总被引数(次)
56446
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