四重PCR检测致病性嗜水气单胞菌

• 作者: 叶欣宇 吴祥庆 廖永志 杨先乐 童桂香 谢宗升 韦信贤 黄国秋 黎小正
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 嗜水气单胞菌 16S rRNA基因 ahpA基因 aerA基因 hlyA基因 四重PCR
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 587-593
• 页数: 7页
• 分类号: R378
• 字数: 6562字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2013.06.013

摘要

目的 建立一种能够快速准确地检测致病性嗜水气单胞菌的四重PCR方法.方法 根据致病性嗜水气单胞菌的丝氨酸蛋白酶(ahpA)基因、气溶素(aerA)基因和溶血素(hlyA)基因的保守序列以及嗜水气单胞菌的16S rRNA基因种属特异性序列分别设计4对特异性引物,通过优化各引物浓度、退火温度和Mg2+浓度,确定了四重PCR的最佳反应条件;然后进行特异性和敏感性试验,并比较其与常规微生物学方法对不同菌株和临床样本的检出率.结果 该方法特异性好,能特异性检测并鉴别出嗜水气单胞菌致病性菌株;检测灵敏度高,最低可检测到约100 fg的嗜水气单胞菌基因组DNA;对9株嗜水气单胞菌的检测结果与常规微生物学方法一致,对56份送检的水产动物样品的检出率为21.4%,高于常规微生物学方法的16.1%,两者检测结果符合率为94.6%.结论 成功建立了能同时检测嗜水气单胞菌16S rRNA、aerA、ahpA和hlyA基因的四重PCR方法,能快速、准确地对嗜水气单胞菌进行检测并区分致病性与非致病性菌株.