南美白对虾精子超低温冷冻保存技术研究

• 作者: 何苹萍 彭敏 李咏梅 杨彦豪 杨春玲 赵永贞 陈晓汉 陈秀荔
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 南美白对虾 精子 超低温冷冻保存 胰蛋白酶消化法 抗冻剂 存活率
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 1382-1389
• 页数: 8页
• 分类号: S945.46
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2013.8.1382

摘要

[目的]建立一种南美白对虾精子超低温冷冻保存方法,为南美白对虾优良种质的长期保存奠定基础.[方法]利用胰蛋白酶消化法获得游离的南美白对虾精子,分别使用灭菌天然海水、无钙人工海水、3％等渗NaCl溶液和0.9％生理盐水作为基础液,并以不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)、甘油、甲醇及其与海藻糖的混合溶液作为抗冻剂,在4种不同降温程序下超低温冷冻保存南美白对虾精子,然后在不同的温度下复苏冷冻精子,以伊红-苯胺黑染色法检测精子存活率.[结果]使用1.00 g/L胰蛋白酶消化精荚5 min能获得大量游离的南美白对虾精子,以灭菌天然海水为基础液,以10％ DMSO和0.25 mol/L海藻糖为抗冻剂,在P-1降温程序(4℃平衡30 min,以-5℃/min的速率降至-20 ℃:-20℃平衡5 min,以-10℃/min的速率降至-80 ℃;-80℃平衡5 min,然后置于液氮中保存)下超低温冷冻保存南美白对虾精子,经37℃水浴复苏后精子存活率最高.[结论]建立的南美白对虾精子超低温冷冻保存方法具有可行性,为南美白对虾精子冷冻保存库的建立提供了技术支撑.