双通道实时荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌药物耐药相关基因突变

• 作者: 李静 柳清云 梅建 罗涛 高谦
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 关键词: 实时聚合酶链反应 分枝杆菌,结核 突变
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 63-67
• 页数: 5页
• 字数: 4115字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2013.01.016

摘要

目的 基于双标记荧光探针熔解曲线分析技术,建立一种利用实时荧光PCR快速检测结核分枝杆菌耐药突变的方法.方法 根据结核分枝杆菌一线药物常见耐药突变位点(包括rpoB 81 bp耐药决定区、inhA启动子、katG315、ahpC启动子以及embB306)设计6条荧光双标记探针和对应引物,通过PCR扩增耐药突变位点所在基因片段,在扩增完成后通过熔解曲线检测分析实现对耐药突变的快速检测.通过对2008年上海市疾控中心收集的76株临床耐多药(MDR)菌株进行检测,验证本方法的敏感度和特异度.结果 本方法成功从76株MDR菌株中检测出相关耐药突变,各种突变对应ATm值范围为1.8～14.4℃.将检测结果和测序结果对比表明该方法检测敏感度和特异度都为100％(rpoB,80/80:inhA,7/7；katG315,59/59；ahpC,8/8；embB306,27/27).本方法可以成功从最低浓度为100拷贝/μl的结核分枝杆菌DNA样本中准确地检测耐药突变.结论 双通道实时荧光PCR熔解曲线法可以快速灵敏地检测结核分枝杆菌常见耐药突变.该方法具有检测迅速准确、结果易判读、交叉污染概率低等特点,可用于快速检测临床结核耐药相关的基因突变,并对结核耐药情况进行评估.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梅建	上海市疾病预防控制中心结核病防治科	81	1057	19.0	28.0
2	李静	上海市疾病预防控制中心结核病防治科	23	234	9.0	14.0