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摘要:
通过重叠延伸PCR将宇佐米曲霉中1 347 bp的酸性蛋白酶基因pepA与黑曲霉耱化酶基因5′同源臂和3′同源臂进行拼接,构建pepA基因表达框.将此表达框插入载体pSZH中,构建黑曲霉同源重组表达载体pSZH-pepA.将裁体pSZH-pepA通过冻融法转化农杆菌AGL1,进而通过农杆菌介导法转化高产糖化酶的黑曲霉菌丝体.以PDA作为共培养培养基,乙酰丁香酮(简称AS)浓度200μmol·mL-1的条件下,28℃恒温静置培养48 h,经潮霉素筛选和PCR鉴定获得3株重组菌株.以出发菌株作为对照,对3株重组菌株静置培养7d后的发酵液上清进行酶活测定,结果发现酸性蛋白酶酶活最高达45.56 U· mL-1,而出发菌株的酸性蛋白酶酶活仅为3.72 U· mL-1,表明酸性蛋白酶基因pepA在高产糖化酶的黑曲霉中得到表达.研究建立了农杆菌介导的pepA基因导入黑曲霉菌丝体的转化体系,为实现酸性蛋白酶在黑由霉菌丝体中高效表达奠定基础.
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文献信息
篇名 农杆菌介导pepA基因对黑曲霉菌丝体的遗传转化
来源期刊 东北农业大学学报 学科 农学
关键词 酸性蛋白酶 黑曲霉 重叠延伸PCR ATMT
年,卷(期) 2013,(5) 所属期刊栏目 研究报告
研究方向 页码范围 29-35
页数 7页 分类号 S767.5|X172
字数 3968字 语种 中文
DOI
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 李杰 东北农业大学生命科学学院 193 1723 20.0 30.0
2 汪天虹 山东大学生命科学学院 40 924 15.0 30.0
3 钟耀华 山东大学生命科学学院 9 72 5.0 8.0
4 赵宁 东北农业大学生命科学学院 7 55 3.0 7.0
5 李硕然 东北农业大学生命科学学院 2 6 2.0 2.0
6 张谷楠 东北农业大学生命科学学院 2 6 2.0 2.0
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研究主题发展历程
节点文献
酸性蛋白酶
黑曲霉
重叠延伸PCR
ATMT
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
东北农业大学学报
月刊
1005-9369
23-1391/S
大16开
哈尔滨市木材街59号
14-47
1957
chi
出版文献量(篇)
4521
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9
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