农杆菌介导pepA基因对黑曲霉菌丝体的遗传转化

• 作者: 张谷楠 李杰 李硕然 汪天虹 赵宁 钟耀华
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 酸性蛋白酶 黑曲霉 重叠延伸PCR ATMT
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 29-35
• 页数: 7页
• 分类号: S767.5|X172
• 字数: 3968字
• 语种: 中文

摘要

通过重叠延伸PCR将宇佐米曲霉中1 347 bp的酸性蛋白酶基因pepA与黑曲霉耱化酶基因5′同源臂和3′同源臂进行拼接,构建pepA基因表达框.将此表达框插入载体pSZH中,构建黑曲霉同源重组表达载体pSZH-pepA.将裁体pSZH-pepA通过冻融法转化农杆菌AGL1,进而通过农杆菌介导法转化高产糖化酶的黑曲霉菌丝体.以PDA作为共培养培养基,乙酰丁香酮(简称AS)浓度200μmol·mL-1的条件下,28℃恒温静置培养48 h,经潮霉素筛选和PCR鉴定获得3株重组菌株.以出发菌株作为对照,对3株重组菌株静置培养7d后的发酵液上清进行酶活测定,结果发现酸性蛋白酶酶活最高达45.56 U· mL-1,而出发菌株的酸性蛋白酶酶活仅为3.72 U· mL-1,表明酸性蛋白酶基因pepA在高产糖化酶的黑曲霉中得到表达.研究建立了农杆菌介导的pepA基因导入黑曲霉菌丝体的转化体系,为实现酸性蛋白酶在黑由霉菌丝体中高效表达奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李杰	东北农业大学生命科学学院	193	1723	20.0	30.0
2	汪天虹	山东大学生命科学学院	40	924	15.0	30.0
3	钟耀华	山东大学生命科学学院	9	72	5.0	8.0
4	赵宁	东北农业大学生命科学学院	7	55	3.0	7.0
5	李硕然	东北农业大学生命科学学院	2	6	2.0	2.0
6	张谷楠	东北农业大学生命科学学院	2	6	2.0	2.0