根癌农杆菌介导柱花草炭疽菌遗传转化体系的优化

• 作者: 习金根 张世清 易克贤 胡彩平 蔡志英 郑金龙 陈河龙 高建明 黄贵修
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 柱花草 炭疽菌 遗传转化
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 遗传育种、作物营养与栽培
• 页码范围: 1007-1012
• 页数: 6页
• 分类号: Q939.96
• 字数: 5080字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2013.06.002

摘要

选取含有氯嘧磺隆抗性标记的ILV1基因和报告基因GFP二元载体的农杆菌AGL-1,采用单因子和双因子方法研究根癌农杆菌AGL-1介导柱花草炭疽菌CH008转化过程中各主要因素对转化率的影响,优化构建ATMT转化柱花草胶孢炭疽菌体系条件,使转化效率达到300 ～400个转化子/106个炭疽孢子,即根癌农杆菌AGL-1浓度OD600=0.8,炭疽菌分生孢子浓度为1x106个/mL,AS浓度为100 μmol/L,诱导时间为6h,共培养温度和时间分别为25 ℃和4d.经PCR检测都有GFP片段,并能够表达绿色荧光蛋白.这为进一步开展炭疽菌对柱花草的致病机理研究提供了依据,优化转化体系有利于后续突变体库的扩大、筛选突变体和致病功能基因的研究.