抗大肠癌相关蛋白SCAP47抗体的制备与鉴定

• 作者: 夏长虹 曹建彪 李世荣 李浩然 郭汉斌 龚丽娟
• 来源期刊: 解放军医药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结直肠肿瘤 相关蛋白 抗体,单克隆 兔 小鼠,近交BALBC
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 14-20
• 页数: 7页
• 分类号: R-332|R735.34
• 字数: 7101字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-140X.2013.05.004

摘要

目的 应用自制的大肠癌相关蛋白SCAP47作为抗原制备兔多抗血清和鼠单克隆抗体,测定效价,鉴定特性,为相关抗体的临床应用提供可行性依据.方法 ①制备兔多抗血清:实验动物为纯种新西兰白兔,卡介苗基础免疫后,分次多点注射抗原,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和双向凝胶扩散法测血清效价,分离高效价血清.②制备小鼠单克隆抗体:实验动物为BALB/c小鼠,分次腹腔、脾内注射抗原蛋白乳剂和水剂,采用ELISA测血清效价,高效价鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合,有限稀释法亚克隆阳性细胞株,克隆细胞种植小鼠腹腔,收获腹水,纯化单克隆抗体,鉴定抗体效价、亚类、纯度.结果 ①3只实验兔中2只产生了一定效价的多抗血清,多抗血清效价:间接ELISA结果兔1为1∶6400,兔2为1∶1600;琼脂糖双扩试验结果兔1为1∶32,兔2为1∶4.②克隆了2株能产生抗SCAP47抗原的单克隆抗体细胞株抗SCAP47-B1和抗SCAP47-B2,将细胞种植于BALB/c小鼠腹腔,成功诱导小鼠腹水生成,以50、22 kD为主要蛋白,Western blot试验证实为小鼠IgG,琼脂糖双扩试验显示为小鼠IgG2a亚型;免疫荧光细胞组织化学试验显示,SCAP47蛋白在大肠癌细胞膜表面可表达,正常对照细胞未见表达,大肠癌细胞膜表面表达的SCAP47蛋白可与抗SCAP47-B1细胞株分泌的抗体产生特异性结合反应;纯化的单克隆抗体效价:SCAP47-B1为1∶1600,SCAP47-B2则达到1∶6400.结论 通过杂交瘤单克隆抗体技术制备和纯化的抗SCAP47单克隆抗体,经效价检测和性质鉴定,证明初步达到了免疫试验的要求,为进一步的临床应用提供了可行性依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龚丽娟	北京军区总医院全军肝病治疗中心	57	575	11.0	22.0
2	李浩然	北京军区总医院全军肝病治疗中心	25	128	7.0	9.0
3	曹建彪	北京军区总医院全军肝病治疗中心	128	621	12.0	16.0
4	郭汉斌	北京军区总医院全军肝病治疗中心	27	164	8.0	12.0
5	李世荣	北京军区总医院全军肝病治疗中心	160	1277	20.0	26.0
6	夏长虹	北京军区总医院全军肝病治疗中心	12	74	4.0	8.0