非洲猪瘟病毒p54蛋白的高效表达及在ELISA中的应用

• 作者: 刘春菊 吴晓东 张启迪 张康 王丽萍 秦晓冰 臧京帅 陈琳琳 龚振华
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 非洲猪瘟病毒 p54蛋白 ELISA
• 年，卷（期）: 2013,（11）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1832-1837
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.1
• 字数: 4027字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2013.11.019

摘要

本研究旨在高效原核表达非洲猪瘟病毒(ASFV) p54蛋白,并进一步将其用于ELISA试验研究.参考非洲猪瘟病毒Con09/Bzz020株P54基因(E183L)的核苷酸序列,通过序列优化后合成P54基因,克隆至表达载体pET-30c(+),构建重组质粒pET-30c(+)-p54.结果显示,pET-30c(+)-p54有完整的阅读框架,可高效表达分子量约20.7 ku的p54蛋白,该蛋白表达稳定,具有可溶性,易于纯化,纯度高达900 μg·mL-1,所表达的p54蛋白的氨基酸序列与Con09/Bzz020株p54蛋白氨基酸序列相同;Western blot试验显示,表达的p54蛋白能与ASFV阳性血清发生特异性反应;ELISA试验显示,p54蛋白针对ASFV阳性血清和阴性血清的P/N值为4.67.研究结果证实p54蛋白表达产量高,易于纯化,具有较好的抗原性,可用于非洲猪瘟ELISA诊断.