阪崎克罗诺杆菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测技术研究

• 作者: 周蒂 王莉萍 黄焘
• 来源期刊: 环境与职业医学
• 学科: 医学
• 关键词: 阪崎克罗诺杆菌 实时荧光PCR TaqMan-MGB探针
• 年，卷（期）: 2013,（11）
• 所属期刊栏目: 方法研究
• 页码范围: 875-879
• 分类号: R115
• 语种: 中文

摘要

[目的]建立阪崎克罗诺杆菌TaqMan-MGB探针实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)快速检测方法.[方法]在阪崎克罗诺杆菌保守序列设计一对特异性引物和TaqMan-MGB探针,通过对PCR反应条件和扩增体系的优化,建立阪崎克罗诺杆菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测方法;用已知浓度的阪崎克罗诺杆菌验证其敏感性;用阪崎克罗诺杆菌、大肠埃希菌、鸭沙门菌株、柠檬酸杆菌等菌株验证其特异性;用婴幼儿配方粉等食品开展TaqMan-MGB探针实时荧光PCR技术与常规检测方法符合性比较. [结果]本研究建立的阪崎克罗诺杆菌实时荧光PCR检测技术,反应循环(cycle threshold,CT)值与模板浓度的对数值具有良好的对应关系[(Y)=-3.06×log(X)+36.63,R2=0.999],最低检测浓度为100 CFU/mL,经36℃增菌8h最低检测限可达1 CFU/mL,敏感性较普通TaqMan探针高10倍;11株阪崎克罗诺杆菌CT值均小于30,而大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、柠檬酸杆菌等30株菌株CT值大于30或扩增曲线成一平滑直线;隔天连续5次反应CT值变异系数小于5％;140件不同批次不同婴幼儿配方粉、192件婴幼儿谷物辅助食品检测结果与常规分离培养比较,差异无统计学意义(x2=0.624,P＞0.05). [结论]阪崎克罗诺杆菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测技术具有特异性强、敏感性高、易操作等优点,适用于婴儿配方粉等食品开展阪崎克罗诺杆菌快速检测与监测工作.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄焘		2	11	2.0	2.0
2	周蒂		2	9	2.0	2.0
3	王莉萍	温州医学院仁济学院	1	2	1.0	1.0