慢病毒载体介导稳定表达CD163的PAM细胞系的建立及对PRRSV感染的研究

• 作者: 周恩民 王向鹏 肖书奇 魏蕊芳
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: CD163 慢病毒载体 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪肺泡巨噬细胞
• 年，卷（期）: 2013,（11）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1797-1804
• 页数: 8页
• 分类号: S858.285.3|Q789
• 字数: 5829字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2013.11.014

摘要

本研究旨在通过慢病毒载体系统将猪源CD163转染入永生化的猪肺泡巨噬细胞(PAM)系(CRL-2843),建立稳定表达CD163的PAM细胞系(PAM-CD163)及验证该细胞系对PRRSV的易感性.用PCR方法从p JET1.2-CD163载体上扩增CD163基因编码区,通过酶切连接构建慢病毒表达载体pTrip-CMV-CD163-IRES-pur.将该质粒与慢病毒包装质粒psPAX2和pMD2.G共转染293-T细胞,包装表达CD163的慢病毒.将收获的慢病毒在Polybrene的介导下转导至永生化PAM细胞,采用嘌呤霉素筛选和细胞有限稀释法筛选出稳定表达CD163的PAM细胞系.应用得到的细胞系进行PRRSV感染试验.经过RT-PCR、间接免疫荧光试验、Westernblot和流式细胞术试验证实,筛选出1株能稳定表达CD163的PAM细胞系,命名为PAM-CD163.该株细胞对PRRSV高度易感,PRRSV在PAM-CD163细胞上的毒价可以达到105.0 TCID50·mL-1以上.建立了稳定表达CD163的PAM细胞系,可以用于PRRSV的分离培养和细胞受体的研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王向鹏	西北农林科技大学动物医学院	3	16	2.0	3.0
2	周恩民	西北农林科技大学动物医学院	15	41	4.0	5.0
3	肖书奇	西北农林科技大学动物医学院	7	9	2.0	3.0
4	魏蕊芳	西北农林科技大学动物医学院	1	6	1.0	1.0