人凝血因子IX在毕赤酵母中的表达及活性测定

• 作者: 刘新风 戴永刚
• 来源期刊: 国际医药卫生导报
• 关键词: 人凝血因子IX(hFIX) 毕赤酵母 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2013,（11）
• 所属期刊栏目: 临床检验
• 页码范围: 1679-1682
• 页数: 4页
• 字数: 2192字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1007-1245.2013.11.052

摘要

目的 人凝血因子IX(hFIX蛋白)在人类内源性凝血过程中起着非常重要的作用.hFIX表达量绝对或相对不足会导致B型血友病.本研究用毕赤酵母生产重组hFIX.方法 首先用RT-PCR将人肝脏hFIX的mRNA进行扩增、测序并插入到pPIC9K中载体,构建pPIC9K-hFIX酵母分泌表达载体,再将pPIC9K-hFIX电转化进入毕赤酵母SMD1168,然后通过G418抗药性能力的大小筛选获得高拷贝且表达量高的重组菌株.结果 通过SDS-PAGE和免疫印迹分析表明本研究获得的重组毕赤酵母hFⅨ表达量达到100 mg/L；经过阴离子交换和半透膜扩散透析得到纯化的蛋白.检测重组hFⅨ的比活力,约为天然hFIX凝血活性的5.5％.结论 我们可以优化找到更好的生产条件,使用其他比SMD1168更好的菌株,以获取更好生产量和质量；另外,我们也有很多可以增强在酵母生产的hFIX的活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘新风	山东省交通医院检验科	28	151	8.0	11.0
2	戴永刚	山东省交通医院检验科	5	6	2.0	2.0