油菜黑胫病菌 ISSR-PCR 反应体系优化

• 作者: 包玉英 宋培玲 张键 李子钦 李欣洲 郝丽芬
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 油菜黑胫病原菌 ISSR-PCR 体系优化
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 页码范围: 204-207
• 页数: 4页
• 分类号: S435.654
• 字数: 3511字
• 语种: 中文

摘要

通过正交试验设计，对油菜黑胫病菌ISSR-PCR 反应体系的各影响因素进行研究，即从 Taq 酶、Mg2＋、dNTPs、引物以及模板浓度5因素4水平进行优化，筛选并建立了适合油菜黑胫病菌ISSR分子标记的最佳反应体系，即在25μL反应体系中包含Taq DNA酶1 U，Mg2＋2．0 mmol/L，dNTPs 0．2 mmol/L，引物0．6μmol/L，模板40 ng以及2．5μL 10×Buffer。并以扩增条带丰富、清晰、稳定性强为原则，从所查找的110条引物中筛选出24条适于油菜黑胫病菌ISSR-PCR扩增的引物，同时对各引物的最佳退火温度进行了筛选确定，经对20株病原菌的稳定性检测，证实该优化体系可用于研究该病原菌的遗传多样性。