RNAi技术沉默子宫颈癌HeLa细胞中HPA基因的表达对细胞侵袭力的影响

• 作者: 吕琼莹 张文婷 张蔚 程静 钟亚娟
• 来源期刊: 中华妇产科杂志
• 关键词: 宫颈肿瘤 HeLa细胞 葡糖醛酸糖苷酶 RNA干扰 肿瘤侵润
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 532-537
• 页数: 6页
• 字数: 5072字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-567x.2013.07.013

摘要

目的 利用RNA干扰(RNAi)技术沉默宫颈癌细胞系HeLa细胞中乙酰肝素酶(HPA)基因的表达,并探讨其对宫颈癌细胞侵袭力的影响.方法 根据GenBank数据库提供的HPA基因核苷酸序列,设计4对针对HPA基因的短发夹状RNA(shRNA)特异性寡核苷酸序列(即shRNA-HPA-592、shRNA-HPA-995、shRNA-HPA-1351、shRNA-HPA-1658),并设计1条随机无关序列作阴性对照,分 别克隆到pYr-1.1质粒中.用脂质体法将上述质粒转染入HeLa细胞,以未转染质粒者为空白对照,采用逆转录(RT)-PCR技术、免疫荧光法分别检测转染后HeLa细胞中HPA mRNA和蛋白的表达,筛选出其中对HPA基因沉默效果最佳的质粒.将该质粒转染入HeLa细胞,采用穿膜(transwell)小室体外侵袭实验检测转染后HeLa细胞侵袭力的变化.结果 RT-PCR技术检测显示,转染shRNA-HPA-592、shRNA-HPA-995、shRNA-HPA-1351、shRNA-HPA-1658质粒后,HeLa细胞中HPA mRNA的表达水平分别为0.54±0.05、0.89 ±0.18、0.82±0.22、0.91 ±0.47,阴性对照和空白对照细胞中HPAmRNA的表达水平分别为1.31 ±0.72和1.09±0.16；免疫荧光法检测显示,转染上述不同质粒后HeLa细胞的胞质中均可见绿色荧光,HPA蛋白均呈阳性表达,其中转染shRNA-HPA-592质粒后HeLa细胞的胞质中绿色荧光强度最弱.故筛选出的对HPA基因沉默效果最佳的质粒即为shRNA-HPA-592质粒.体外侵袭实验检测显示,转染shRNA-HPA-592质粒后HeLa细胞的穿膜细胞数为(44±4)个,明显低于空白对照、阴性对照[分别为(182±6)、(258±17)个],差异有统计学意义(P＜0.01)；而阴性对照与空白对照比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 本研究成功筛选出了靶向HPA基因的shRNA表达质粒,转染宫颈癌HeLa细胞后可高效抑制其HPA基因的表达,明显降低宫颈癌细胞的侵袭力,为进一步研究HPA基因的表达与宫颈癌侵袭的机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	程静	武汉大学人民医院妇科	17	91	3.0	9.0
2	张蔚	武汉大学人民医院妇科	164	1048	16.0	24.0
3	张文婷	武汉大学人民医院妇科	22	156	5.0	12.0
4	钟亚娟	武汉大学人民医院妇科	17	145	5.0	12.0
5	吕琼莹	武汉大学人民医院妇科	7	89	3.0	7.0