hAFP及hTERT双启动子调控的针对人IGF-Ⅱ基因的siRNA特异性抑制人肝癌细胞生长

• 作者: 吴胜兰 周鸿科 张良鹏 曹明溶 汤绍辉 王旷靖 罗羽宏
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: hAFP/h TERT双启动子 RNA干扰 人胰岛素样生长因子Ⅱ 癌,肝细胞
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1422-1427
• 页数: 6页
• 分类号: R735
• 字数: 4205字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2013.08.014

摘要

目的:设计并筛选高效沉默胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因的小干扰RNA (siRNA)序列,构建由重组人甲胎蛋白(hAFP)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)双启动子调控的该siRNA表达载体,观察其对肝癌细胞生长的影响.方法:根据siRNA设计原则,参照IGF-Ⅱ mRNA序列设计3对siRNA序列及1对阴性对照序列,转染人肝癌Huh7细胞,转染24h后采用实时荧光定量PCR检测IGF-Ⅱ mRNA表达量变化,筛选干扰效率最高的siRNA序列.采用PCR扩增出hAFP及hTERT启动子的核心序列,应用基因重组技术构建重组hAF和hTERT双启动子调控的该siRNA表达载体.将上述siRNA表达载体转染Huh7细胞及L-02人正常肝细胞,观察IGF-Ⅱ mRNA表达及细胞生长情况变化.结果:实时荧光定量PCR显示,siRNA3在25 nmol/L浓度时抑制效率最高,约90％.成功扩增hAFP及hTERT启动子核心序列,将其分别克隆人pGL3-Basic载体,构建成重组pGL3-hAFP-hTERT载体;将siRNA3克隆至pGL3-hAFP-hTERT载体,构建成重组pGL3-hAFP-hTERT-siRNA3表达载体.Huh7细胞IGF-Ⅱ mRNA表达量显著降低,抑制效率达86％,细胞增殖受到明显抑制,G1期细胞比例显著增加;L-02细胞上述指标无明显改变.结论:成功构建双重RNA聚合酶Ⅱ启动子(hAFP及hTERT双启动子)调控的针对IGF-H基因的siRNA表达载体,即pGL3-hAFP-hTERT-siRNA3;该siRNA表达载体可特异性抑制IGF-Ⅱ mRNA表达及肝癌细胞生长.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹明溶	暨南大学附属第一医院普通外科	56	227	9.0	12.0
2	汤绍辉	暨南大学附属第一医院消化科	164	444	9.0	14.0
3	罗羽宏	暨南大学附属第一医院普通外科	33	174	8.0	11.0
4	吴胜兰	暨南大学附属第一医院消化科	8	20	3.0	4.0
5	周鸿科	暨南大学附属第一医院消化科	16	54	5.0	6.0
6	王旷靖	暨南大学附属第一医院消化科	10	33	3.0	5.0
7	张良鹏	暨南大学附属第一医院消化科	6	17	3.0	3.0