胸腺素β4对体外培养的兔角膜上皮细胞氧化损伤的保护作用

• 作者: 姜志昕 李轩 汤欣 郝朋
• 来源期刊: 中华眼科杂志
• 关键词: 上皮,角膜 上皮细胞 胸腺素 氧化性应激 细胞凋亡 细胞,培养的
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 716-722
• 页数: 7页
• 字数: 5401字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0412-4081.2013.08.010

摘要

目的 探讨胸腺素β4(Tβ4)对体外培养的兔角膜上皮细胞氧化损伤的影响.方法 实验研究.采用组织块培养法获得原代兔角膜上皮细胞并进行传代培养.采用形态学观察和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测成熟角蛋白(keratin) 12和缝隙连接蛋白(connexin) 43的表达情况,对细胞进行鉴定.以H2O2处理角膜上皮细胞制备体外细胞氧化损伤模型,并观测Tβ4对其保护作用.实验分为4组:正常对照组、Tβ4组、H2O2组和H2O2+ Tβ4组.采用MTT比色法检测角膜上皮细胞存活度；运用TUNEL染色观察角膜上皮细胞凋亡；利用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平；通过划痕实验观察角膜上皮细胞的迁移运动能力.组间均数比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 培养的细胞呈圆形、卵圆形和多边形,铺路石样生长；RT-PCR法检测显示培养的细胞表达角膜上皮细胞特异性基因,keratin 12和connexin 43,呈现角膜上皮细胞的特征.经H2O2刺激后,角膜上皮细胞的存活率(67.20％±5.87％)较正常对照组显著下降(l00.00％±9.99％)(4个组间比较F=18.61,P=0.001,两两比较P=0.000)；H2O2+Tβ4组细胞存活率(83.42％±7.43％)与H2O2组(67.20％±5.87％)比较明显增高(P =0.023).4个组间细胞划痕实验结果的差异具有统计学意义(F =36.38,P=0.000),在12 hTβ4组划痕已基本消失,细胞迁移率为117.6％ ±2.22％,与正常对照组(100.00％±4.06％)相比显著增加(P=0.005)；12h时H2O2+Tβ4组与H2O2组相比,细胞迁移率为96.57％±8.22％,与H2O2组(64.38％±11.08％)相比明显增加(P=0.000).H2 O2刺激后细胞内ROS水平为234.42％±22.15％,较正常对照组(100.00％±5.28％)明显增加(P =0.000),H2O2+Tβ4组细胞内ROS水平(163.26％±10.53％)虽然较正常对照组偏高,但与H2O2组(234.42％ ±22.15％)比较显著降低(P=0.000).TUNEL染色结果显示,H2O2组呈现较多凋亡细胞,H2 O2+ Tβ4组与H2O2组相比,凋亡细胞明显减少.结论 Tβ4通过抑制氧化损伤后细胞内ROS的产生对氧化应激损伤后的角膜上皮细胞具有减少细胞凋亡,增加细胞存活率并促进细胞迁移的作用,提示Tβ4对角膜上皮细胞氧化损伤具有保护作用.