低氧条件下视网膜母细胞瘤细胞表达肿瘤干细胞标志物及向内皮样细胞诱导分化的体外研究

• 作者: 张丽娜 徐强 杨文毅 牛膺筠 王谦 赵桂秋
• 来源期刊: 中华眼科杂志
• 关键词: 视网膜母细胞瘤 肿瘤干细胞 缺氧诱导因子1,α亚基 肿瘤标记,生物学 新生血管化,病理性
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 736-743
• 页数: 8页
• 字数: 6943字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0412-4081.2013.08.013

摘要

目的 探讨低氧微环境下人视网膜母细胞瘤(RB)细胞表达肿瘤干细胞标志物及向内皮细胞诱导分化的能力与相关机制.方法 实验研究.将人RB细胞株Y79细胞分为正常组、低氧组和预处理组.显微镜下观察3组细胞的形态变化,流式细胞仪检测RB细胞标志物神经元特异性烯醇化酶(NES)及肿瘤干细胞标志物ATP结合盒膜转运蛋白G2(ABCG2)的表达情况,免疫印迹法和实时荧光(real-time) PCR法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达情况.向内皮细胞诱导分化后应用免疫荧光法检测CD31、vWF的蛋白表达情况,吞噬实验检测其吞噬ac-LDL的能力,三维培养基中观测其血管生成拟态(VM)形成能力,免疫印迹法检测HIF-1α、生促红素人肝细胞A2(EphA2)、磷酸肌醇化激酶3(PI3K)的蛋白表达情况.各组间总体差异的比较采用单因素方差分析,进一步的两两比较采用SNK-q检验.结果 显微镜下观察结果显示,正常组Y79细胞呈单个或团聚状悬浮生长,低氧组部分细胞伸出突起贴壁生长,预处理组未见贴壁生长的细胞.各组细胞NES及ABCG2染色阳性率差异有统计学意义(FNES=698.45,FABCG2=864.48,P值均＜0.01)；与正常组[(98.2±2.5)％,(2.1±2.1)％]比较,低氧组NES阳性率[(35.1±3.4)％]明显降低(q=46.11,P＜0.01),ABCG2阳性率[(67.4±3.6)％]明显升高(q=50.89,P ＜0.01)；预处理组与正常组NES和ABCG2蛋白表达的差异均无统计学意义(P＞0.05).与正常组(蛋白:0.165 ±0.056,mRNA:0.927 ±0.715)比较,低氧组HIF-1 α蛋白(1.094±0.077)及mRNA(6.408±0.686)表达量均明显增加(q蛋白=31.810,P ＜0.01；qmRNA=18.40,P ＜0.01),预处理组HIF-1 α蛋白(0.218 ±0.061)表达无明显变化(q=1.81,P＞0.05),mRNA(7.219 ±0.591)的表达增加(q=21.12,P＜0.05).向内皮细胞诱导分化实验结果示,低氧组Y79细胞表达CD31、vWF,并获得ac-LDL吞噬能力及VM形成能力,HIF-1 α、EphA2及PI3K蛋白(1.440±0.089、0.377±0.056、0.762±0.090)表达水平较正常组(0.327±0.108、0.194 ±0.033、0.402±0.068)明显增加(q=8.72 ～23.00,P值均＜0.01).结论 低氧条件下部分RB细胞表达肿瘤干细胞标志物,能够向内皮细胞诱导分化从而获得部分内皮细胞表型及功能,并能在三维培养基上形成管道样VM结构；HIF-1d通过EphA2/PI3K信号通路在其中发挥重要作用.