LMP-1基因慢病毒载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞的表达

• 作者: 侯慧铭 向川 张桦栋 郭丽
• 来源期刊: 中国骨伤
• 关键词: 慢病毒 LMP-1 骨髓间充质干细胞 骨质疏松
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 841-844
• 页数: 4页
• 字数: 3557字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-0034.2013.10.012

摘要

目的:构建人LMP-1重组慢病毒载体,体外转染大鼠骨髓间充质干细胞,检测LMP-1基因在大鼠骨髓间充质干细胞的表达.方法:利用PCR法从cDNA文库中钓取LMP-1基因,将其与经Age Ⅰ酶切线性化的慢病毒载体pGC-FU-EGFP相连接,转化感受态大肠杆菌,筛选出阳性克隆pGC-FU-LMP-1-EGFP,基因测序对其鉴定.经293T细胞包装后,收集富含病毒颗粒LV-LMP-1-EGFP的细胞上清,浓缩并标定滴度,RT-PCR检测并鉴定.以最佳MOI值体外转染大鼠骨髓间充质干细胞,荧光显微镜观察转染是否成功,流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR和Western blot检测转染细胞LMP-1基因的表达.结果:①基因测序及RT-PCR检测证实携带人LMP-1基因的慢病毒载体构建成功,包装后获得滴度为2× 108 TU/ml的LV-LMP-1-EGFP.②以MOI=100转染大鼠骨髓间充质干细胞,荧光显微镜下可见大量绿色荧光蛋白表达,转染效率可达93.5％,经RT-PCR与Western blot检测,被转染细胞内有LMP-1基因表达.结论:成功构建携带人LMP-1基因的慢病毒载体,可高效转染大鼠骨髓间充质干细胞,被转染细胞可高效表达LMP-1基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	向川	山西医科大学第二医院骨科	60	354	9.0	16.0
2	张桦栋	山西医科大学第二医院骨科	7	18	2.0	3.0
3	侯慧铭	山西医科大学第二医院骨科	3	16	2.0	3.0
4	郭丽	山西医科大学第二医院骨科	15	29	3.0	5.0